DNA胞嘧啶甲基化是一個重要的DNA修飾,植物中DNA甲基化可調節基因和轉座子的表達。通常甲基化水平與基因表達負相關,在植物中的DNA甲基化發生在CG、CHG和CHH區域。然而,在非CG區域的DNA甲基化不僅在植物中廣泛存在,并且在哺乳動物組織中也大量存在,如大腦和多能細胞等。
結構和功能不同的甲基轉移酶MET1和CMT3、DRM分別使CG位點和非CG位點甲基化,這三種位點的甲基化都優先靶向轉座子區域,對TE沉默很重要。雖然,研究CG和非CG甲基化在基因組調控中的作用具有重要的意義,但由于難以獲得遺傳材料,在主要作物中尚未得到系統的研究。
2021年6月13日,南方科技大學翟繼先團隊和中國水稻研究所王克劍在Plant Cell 發表了題為Multiplex CRISPR-Cas9 editing of DNA methyltransferases in rice uncovers a class of non-CG methylation specific for GC-rich regions 的研究工作。該工作通過對水稻DNA甲基轉移酶的多重CRISPR-Cas9編輯揭示了富含GC區域的一類非CG甲基化。
本研究中,作者利用高效的多重CRISPR-Cas9基因組編輯系統,創建了水稻所有9個DNA甲基轉移酶的單基因和多基因敲除突變體,并在單核苷酸分辨率下分析了它們的全基因組甲基化狀態。發現,DRM2、CMT2和CMT3功能的同時喪失,在擬南芥中完全消除了所有非CG甲基化,但在水稻中只有部分減少。在水稻Os-dcc (Osdrm2/cmt2/cmt3a) 三重突變體中,在非CG環境中保持高度甲基化的區域具有較高的GC含量。此外,Os-ddcc(Osdrm2/drm3/cmt2/cmt3a/cmt3b)五重突變體消除了Os-DCC突變體中殘留的非CG甲基化,但在Os-ddcc(Osdrm2/drm3/cmt2/cmt3a) 四重突變體中保留了殘留的非CG甲基化,表明OsCMT3b在沒有其他主要甲基轉移酶的情況下保持了非CG甲基化。該結果表明,OsCMT3b被亞功能化,以適應水稻基因組中高GC富集區的一組不同的非CG甲基化位點。
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