放射免疫分析試劑

1、標準品

標準品是放射免疫分析法定量的依據，由于以標準品的量用來表示被涮物質的量，故標準品與被測物質應當化學結構一致并具有相同免疫活性。標準品作為定量的基準。應要求高度純化。標準品除含量應具有準確性外，還應具備穩定性，即在合理的貯存條件下保持原來的特性。

按實驗要求，將標準品用緩沖液配成含不同劑量的標準溶液，用于制作標準曲線。

2、標記物

標記抗原應具備：①比放射性高，以保證方法的靈敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期盡可能長，標記一次可較長時間使用，這對來之不易的抗原尤其重要;④標記簡便、易防護。

要準確測量B與F的放射性，必須有足夠的放射性強度。所選用的標記抗原的量，在使用125I時達5000～15000cpm。

3、抗體

應選擇特異性高、親和力強及滴度好的抗體，用于放射免疫測定。

根據稀釋曲線，選擇適當的稀釋度，一般以結合率為50%作為抗血清的稀釋度。

4、B與F分離劑

以2%加膜活性炭溶液為例，2%加膜活性炭溶液的配制：

活性炭2g(杭州木材廠生產，森工牌732型)

右旋糖酐T200.2g

加0.1mol/L PB 至100ml

電磁攪拌1h，然后置于變通冰箱冰箱待用。

5、緩沖液

放射免疫分析技術所用的緩沖液有多種，要通過實驗選用抗體和抗原結合最高的緩沖液。

目前最常用的緩沖液有下列幾種：①磷酸鹽緩沖液;②醋酸鹽緩沖液;③巴比妥緩沖液;④Tris –HCl緩沖液;⑤硼酸緩沖淮。其中以磷酸鹽緩沖液應用最多。

在緩沖液中，除必須有弱酸及弱酸的鹽成分外，還應根據不同檢測項目加入下列物質：①保護蛋白：常用的有牛血清白蛋白或白明膠，濃度為0.1%～0.2%，用以降低試管對抗原的非特異性吸附。②防腐劑：多采用0.1%疊氮鈉、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制劑：如測定心鈉素等肽類激素時，要加入適量的抑肽酶，用以抑制血漿內源性水解酶對待測物的降解;又如測定cAMP、cGMP時，需加入EDTA·2Na，抑制磷酸二酯酶的活性。④阻斷劑：在測定甲狀腺激素或測定某些甾體激素時，必須加阻斷劑，使和蛋白質相結合的激素，變為游離型。常用的阻斷劑有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水楊酸鈉、三氯醋酸鈉等。⑤載體蛋白：采用二抗作B與F分離劑時，要向反應液中加入適量與第一抗體同種動物的正常血清。在測定不含有血漿蛋白的樣品時，用PEG沉淀劑分離B、F，必須加適量γ球蛋白或正常人混合血清。

在神經肽的RIA時，常用PELH緩沖液，(按1000ml,pH7.6)：

0.1mol/l PB　　　　　　　　980.0ml

0.3mol/L EDTA·2Na　　　　　10.0ml

0.2%洗必泰溶液　　　　　　　10.0ml

溶菌酶　　　　　　　　　　　1.0g