顯微鏡在藥物安全性評價中的作用

　　國家食品藥品監督管理局發布，自2007年1月1日起，創新藥、中藥注射劑、生物制品等產品類別被首批確定強制實施GLP。GLP-藥物的非臨床研究質量管理規范，即通常所說的新藥上市前藥物安全性評價實驗。在GLP實驗過程中會許多實驗都會使用到顯微鏡。

　　一.遺傳毒性實驗

　　1. 單細胞凝膠電泳又稱慧星實驗：將混有待測細胞的瓊脂糖鋪于載玻片上，凝固后浸入冷溶解液中使細胞裂解，在電泳液中解鏈后水平電泳，洗滌后用 DNA 結合熒光染料染色，在熒光顯微鏡下觀察玻片上細胞的熒光圖像，評價 DNA 的損傷程度。實驗結束后，用熒光顯微鏡將“慧星”圖像放大后拍攝下來進行分析。一般實驗室用吖啶橙(490，590，B、IB)做染料，吖啶橙可以和雙鏈DNA(綠色)和單鏈DNA(紅色)結合。

　　2. 骨髓微核實驗：用于檢測化學物質對整體哺乳動物骨髓細胞染色體的損傷作用，如果預先給予供試品，再使用固定劑量的某種已知的染色體斷裂劑，即可研究該供試品對整體哺乳動物染色體損傷的保護作用，即抗突變作用。

　　3. 染色體畸變實驗：用于檢測化學物質對整體動物細胞染色體的損傷作用，如果使用固定劑量的某種已知的致突變劑前后均給予供試品，即可研究該供試品對整體動物細胞染色體損傷的保護作用，即抗突變作用。

　　4. tk基因突變實驗(TK-胸腺嘧啶脫氧核苷激酶)：哺乳動物細胞可被用來檢測化合物的致突變作用。最常用的是小鼠淋巴細胞，檢測淋巴細胞胸苷激酶位點(from TK+ to TK-)地堿基改變，缺失，移位等突變現象。有突變的細胞，tk出現如上現象的，可抵抗嘧啶類似物(如三氟胸苷)的細胞毒作用。當進行TK致突變作用檢測時，將小鼠淋巴細胞先用受試化合物培養一段時間后，將細胞轉移至含有TMP類似物的選擇性培養基中，如果細胞沒有死亡且數目增長，則說明對TMP類似物有抵抗作用。

　　5. Ames實驗(鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶實驗)：主要是一種檢測藥物或食物中是否含有致癌物質的實驗。鼠傷寒沙門氏菌的突變型(即組氨酸缺陷型)菌株在無組氨酸的培養基上不能生長，在有組氨酸的培養基上可以正常生長。但如在無組氨酸的培養基中有致突變物存在時，則沙門氏菌突變型可回復突變為野生型(表現型)，因而在無組氨酸培養基上也能生長，故可根據菌落形成數量，檢查受試物是否為致突變物。

　　二.生殖發育毒性實驗

　　生殖發育毒性實驗是安全評價實驗重要的組成部分。主要包括生殖毒性實驗和發育毒性實驗。生殖毒性實驗：研究外來化合物對生殖細胞發生、卵細胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳過程的損害作用及其評定，評定方法即為生殖毒性實驗。包括一般生殖毒性實驗、致畸敏感期生殖毒性實驗、圍產期生殖毒性實驗等。發育毒性實驗：研究外來化合物對胚胎發育、胎仔發育以及出生幼仔發育的影響及其評定，評定方法稱為發育毒性實驗，其中主要為致畸實驗。

　　藥理室 闞紅衛