栽培和野生竹節參中人參皂苷含量比較

　摘要：目的對野生和栽培竹節參中所含人參皂苷及其含量進行比較。方法參照人參的分析方法，以人參皂苷 Rg1、 Re為對照品，對野生和栽培竹節參進行 TLC鑒別比較，用發HPLC法進行定量分析。結果在選定的薄層條件下，對照品與供試品的薄層圖譜清晰，分離度好，栽培和野生竹節參具有相同的斑點; 對照品在0.48～2.40 μg范圍內具有良好的線性關系，回歸方程為：Y= 336 182X-302 41,  r=0.999 8。結論根據測定和比較的結果，栽培和野生竹節參所含人參皂苷類成分基本相似，野生竹節參根莖中人參皂苷 Rg1、 Re的含量較高。

　　關鍵詞：竹節參；  人參皂苷Rg1、 Re；  薄層色譜；  高效液相色譜

　　竹節參為五加科植物竹節參 Panax japonicus C.A. Mey的干燥根莖。主產于云南、四川、貴州、陜西及湖北等省。竹節參含人參皂苷，具有滋陰補腎，散淤止痛，止血祛痰的功效［1］。其藥材原來主要來自野生，但資源有限，因此在湖北恩施、建始、宣恩、鶴峰等地已開始栽培。由于栽培品與野生品生長環境不盡相同，栽培品成長較快、兩者在化學成分上可能存在差異。為此，我們對栽培的竹節參與野生竹節參所含的人參總皂苷進行了比較，現報道如下。

　　1  儀器與材料

　　1.1   儀器Waters 510液相色譜儀；U6K進樣器；Waters486紫外檢測器；Waters 746數據處理儀；METTLER TOLEDO AL204型萬分之一電子天平。

　　1.2   試劑乙腈為光譜純，重蒸水，磷酸及其他試劑均為分析純。

　　1.3   對照品人參皂苷 Rg1、 Re由中國藥品生物制品檢定所提供。

　　1.4   樣品野生竹節參，栽培竹節參（分別種植于海拔1 560 m和950 m），分別采自湖北恩施自治州建始縣和恩施市，經湖北民族學院張萬福教授鑒定為五加科植物竹節參Panax japonicus C.A. Mey的干燥根莖。

　　2  方法與結果

　　2.1   薄層色譜鑒別參照人參薄層色譜鑒別法［2］，取以上3種藥材樣品，將其下部根與根莖分開，碾成粗粉，各取約1.0 g，精密稱定，置50 ml圓底燒瓶中，加氯仿40 ml 加熱回流1 h，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加水0.5 ml拌勻濕潤后,加水飽和的正丁醇10 ml，超聲處理30 min，吸取上清液，加3倍量氨試液,搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液。取人參皂苷Rg1、 Re對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述8種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以正丁醇醋酸乙酯水（4∶1∶5）上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘數分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同的紫紅色斑點。結果見圖1。

　　2.2  含量測定 參照人參中人參皂苷 Re與人參皂苷Rg1的含量測定進行［2］。

　　1.高海拔栽培竹節參根莖   2. 低海拔栽培竹節參根莖 3. 野生竹節參根莖   4.高海拔栽培竹節參根   5.低海拔栽培竹節參根    6. 野生竹節參根   7. 人參皂苷Rg1對照品   8.人參皂苷Re對照品

　　圖1  竹節參根莖和根人參皂苷薄層色譜圖（略）

　　2.2.1  色譜條件  色譜柱：250 mm×4.6 mm不銹鋼柱，填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠（5 μm）。流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（25∶75）。檢測波長：203 nm；柱溫：30℃。流速1.0 ml?min-1。

　　2.2.2  對照品溶液的制備  因人參皂苷 Re與人參皂苷 Rg1出峰時間相同。在配制對照品溶液時各精密稱定1.2 mg用甲醇溶解，定容至10 ml，即得0.24 mg/ml的對照品溶液。

　　2.2.3  供試品溶液制備 分別取上述野生竹節參和栽培竹節參（海拔1 560 m）的根和根莖藥材粗粉1.0 g，精密稱定，按《中國藥典》2000年版人參含量測定法制備供試品溶液。

　　2.2.4  線性關系考察  精密吸取濃度為0.24 mg/ml的人參皂苷Rg1、 Re的對照品溶液2，4，6，8，10 μl，分別注入色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標（Y），進樣量為橫坐標(X)，計算得回歸方程 Y= 336 182X-30 241，  r=0.999 8。結果表明，進樣量在 0.48～2.40 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

　　2.2.5  精密度實驗  精密吸取同一濃度的對照品溶液，按上述色譜條件測定，重復進樣5次，測定峰面積,，RSD=0.76%，表明精密度良好。

　　2.2.6  穩定性實驗   分別精密吸取同一份對照品溶液，分別于配制0，2，4，8，12，24 h進樣，記錄峰面積積分值，RSD=1.46%，結果表明，供試品溶液在24 h內基本穩定。

　　2.2.7   回收率實驗  精密吸取野生竹節參根莖供試品溶液，加入精密稱定的人參皂苷 Re與人參皂苷 Rg1對照品，依法測定，回收率=98.47%，RSD=2.44%。

　　2.2.8  樣品測定  竹節參（野生）供試品溶液和人參皂苷對照品溶液的色譜圖（見圖2），取4種藥材供試品溶液分別進行測定,其其相應位置人參皂苷的含量，結果見表1。

　　a.人參皂苷對照品    b.竹節參根莖（野生）

　　圖2  竹節參（野生）和人參皂苷 Re+Rg1 HPLC色譜圖（略）

　　表1  栽培和野生竹節參中以人參皂苷（Re+Rg1）為對照品測定的含量（略）

　　3  小結

　　從薄層圖譜可見栽培品與野生品都有對應的5個主要的薄層色譜斑點,說明其所含主要成分基本相似。從 HPLC含量測定結果來看，野生竹節參根莖中人參皂苷 Rg1、 Re的含量遠高于栽培品， 但野生竹節參的根的含量僅略高于栽培品。由于野生竹節參的藥用部位的根莖占絕大部分，從該結果可以看出，野生竹節參質量較優，其原因，可能與野生品生長年限較長有關。該野生樣本生長期在10年以上（10年以內的苗小，一般不采），栽培品均為5年生。栽培品雖然 Rg1、 Re的含量較低，但生長時間較短，可以不受資源限制，并能保護珍貴的野生資源，同時，從薄層色譜可以看出，栽培品根莖中其它皂苷（除Rg1， Re）的含量也僅僅略低于野生品，因此，栽培竹節參仍然有較大優勢，對栽培品的作用值得進一步研究和探討。