植物基因組DNA的RFLP

實驗概要

本實驗介紹了植物基因組DNA的RFLP多態性分析的原理及操作步驟。通過本實驗可了解不同植物或同一植物不同個體之間基因組DNA順序的差異性，掌握DNA限制性酶切片段長度多態性研究的基本方法。

實驗原理

DNA多態性是指DNA堿基順序的差異性。這種差異性不僅存在于不同的植物之間，也存在于同一種植物的不同個體之間。RFLP多態性是指DNA限制性內切酶酶切片段長度的多態性(restniction  fragment length  olymophorphism)。由于堿基順序的差異，在不同的種或同一個種的不同個體之間，它們的基因組DNA限制性內切酶位點的種類和數目不同，經特定的限制性內切酶切割后，所產生的限制性酶切片段在大小（長度）和數目方面自然也存在著差異。通過瓊脂糖凝膠電泳分離和溴化乙錠染色，在紫外檢測儀下觀察，即可直接看到這種差異。電泳分離后，通過Southern雜交也可顯示出已知DNA片段的差異。

主要試劑

1. 限制性內切酶

2. 10×限制性內切酶緩沖液

3. 0.5M EDTA(pH 8.0)

4. 溴化乙錠

5. 瓊脂糖

主要設備

1. 電泳儀和電泳槽

2. 微量離心管

3. 低溫冰箱

4. 37℃水浴鍋

實驗材料

從不同植物或同一植物不同個體分離出的基因組DNA。

實驗步驟

1. 限制性內切酶酶切

   1) 將在-20℃冷凍的DNA在冰上融化。

   2) 取8支微量離心管按下表所示作好標記，并依次加入所需成分。

   3) 混勻，慢速離心2秒，使溶液全部聚于管底。

   4) 37℃保溫2－3小時。

   5) 加入1／10體積的0.5M EDTA溶液終止反應。

2. 瓊脂糖凝膠電泳分析