植物總DNA的快速少量抽提實驗

水稻葉片

液氮 CTAB 氯仿 異戊醇 乙醇 NH4AC EtOH

離心管 離心機

1.  采集適量幼嫩葉片，用液N₂研成粉末，0.4 g裝入1.5 ml離心管中（-20 ℃預冷）。

2.  預熱1.5×CTAB到95 ℃，加1 ml到裝有葉片粉末的離心管中，混勻（防止凍融）。

3.  立即置于65 ℃水浴30min，每5分鐘，上下顛倒1次。

4.  12000 g離心5分鐘。

5.  吸取上清液約600 μl，加入等體積（600 μl）氯仿/異戊醇(24:1)，上下顛倒數次，至下層液相呈深綠色為止。

6.  12000 g離心5分鐘。

7.  取450 μl上清于一新1.5 ml離心管，加入1 ml 95%乙醇和45 μl 10 M NH₄AC），混勻，室溫放置10min。

8.  12000 g離心10min，去上清，用75% EtOH浸洗沉淀，自然干燥約30 min。

9.  加入50 μl 1/10 TE或無菌水（含20 mM/RNase），置于4 ℃過夜，待DNA溶解后，檢測DNA濃度及質量。

1.  盡量取材幼嫩葉片，如太老，酚類物質多，必須用10 mM的β-ME處理。

2.  研缽預凍，粉末至加CTAB前不要融化。

3.  24:1的氯仿/異戊醇抽提時動作應輕柔，轉移用的槍頭最好是剪寬了的。

4.  所用試劑必需滅菌，手套。