液相系統壓力過高問題解析

基本的實驗條件：弱陽離子交換柱，緩沖液作為流動相（用了一天一夜） （對于離子交換，流動相通常為水相，而水相在使用過程當中，特別是當鹽濃度不高，pH 又在中性附近，環境溫度又像現在這樣較高，流動相就很容易長菌，盡管 SOP可能規定能用 24h，哪怕肉眼看不見變渾濁，但是實際上所使用的透明流動相中早就布滿了細菌。而相對于 5μm 的色譜柱來說，2μm 的篩板很容易堵塞，表現出來的就是柱壓在緩慢上升） ；樣品為生物制品。

    儀器報紅后:
    1. 首先把儀器內的積水清理干凈，然后查看每一針樣品的柱壓，發現柱壓
每一針壓力都在上升;

(在遇到諸如壓力問題，出鬼峰或者與原方法測試結果不一致等問題的第一
時間，并不是無規則的處理，不能一下手就主觀判斷儀器臟了，或者樣品不合格了，首先要做的就是調查。而對于液相色譜來說，壓力線是比較直觀的評價是否出問題的一個重要參數)

    2.重新接好色譜柱，使用含高鹽的流動相低流速沖洗色譜柱 0.5h（檢測器一
端未連接），柱壓無明顯變化，仍然很大，排除色譜柱自身原因（正常情況下如果色譜柱臟了，高鹽洗脫壓力下降明顯。）
（在離子交換當中，鹽濃度的增加即增加洗脫能力，這是為了洗脫掉很多原
方法中難洗脫的組分 ，一般來說，出現鬼峰或者出峰不正常會考慮這個方式，
當然，由于本身是生物樣品，確實也是很有可能是洗脫能力太弱導致部分組分無法洗脫而導致柱壓變高； 不接檢測器的操作是正確的， 檢測器相對其他硬件部分，要脆弱一些，污染特別是堵塞對檢測器的傷害都是比較大的；當然，這里還不能直觀判斷不是柱子的問題，其實，柱篩板被細菌堵塞很可能就造成柱壓的升高）

（細菌的大小其實很容易堵塞 2μm 孔徑的篩板，而當所使用的色譜柱粒徑更
小時，篩板孔徑會更小達到 0.2μm，更容易造成堵塞，不僅帶來除上述所說的
壓力增加，還會造成所有組分都裂峰等一系列問題。所以，對于 UPLC 的色譜柱，通常都會推薦使用在線過濾器）

    3.之后打開 purge 閥，流速逐漸調節至 5.0ml/min，壓力為 1.0bar 左右，則證明吸液濾頭沒堵；之后拆開 purge 閥處的濾芯，超聲 5min，重新換上后，壓力無明顯變化，排除濾芯的問題；懷疑進樣針的針座堵了，然后將進樣針升起（進樣針升起后，打開 ALS 門，進樣針將不會下落），將六通閥處的 5、6 號管線換接，進行反沖，大約 0.5h，重新接好管路，系統壓力下降明顯，平衡好色譜柱后，繼續進樣，發現每一針的壓力在逐漸上升，隨后，對流動相（一天一夜）過濾超聲，對針座反沖，之后每一針的壓力均正常。

（purge 閥打開觀察壓力正常，可以排除泵前沒有堵塞點；在針對儀器壓力
增加的問題時，最長用的是分段排查，先找出堵塞點在哪里，再進行有針對的清理；在樣本比較復雜的情況下，首先需要對最容易發生堵塞的針及針座位置，還有負責主/副路切換的六通閥進行排查，清理；除了關注之后進樣的壓力變化，還需對比與原先方法操作壓力進行比較，如高于原壓力，考慮柱子前篩板堵塞，在柱子推薦可以反沖的情況下，不接檢測器進行反沖，盡量把前篩板的固體堵塞物清理干凈）

    使用純水相或者低比例有機相（＜5%甚至更低）的流動相，最好臨用新制，超過兩天需要重新過濾超聲；實驗結束后，用純化水將儀器系統管路沖洗干凈，填充以甲醇或者其他高比例不含鹽有機相保存。