液相色譜儀測定土壤中的苯胺類污染物

苯胺類化合物是土壤中常有的有機污染物。苯胺類化合物常見于印 染、制藥等土壤中，苯胺類是一種重要的有機化工原料，環境中的苯胺主要來源于橡膠、印染、制藥、塑料、陶器上釉等工藝生產過程。環境中苯胺的殘余量已引起 人們的極大關注，早已將其列人優先監測的污染物。主要引起高鐵血紅蛋白血癥和肝、腎及皮膚損害。眼睛接觸：可出現結膜角膜炎。皮膚接觸：可引起皮炎。因此，建立簡單、快速、靈敏、有效的苯胺類測定方法十分必要。

1 實驗部分

1．1 儀器和試劑

1．1．1 儀器

Agilent 1200液相色譜儀；

色譜柱：Ultimate XB-C18  4.60×250mm,5 um .

1．1．2 試劑

1) 苯胺、鄰硝基苯胺、間硝基苯胺、對硝基苯胺、2，4一二硝基苯胺、

2，6一二硝基苯胺、3，5一二硝基苯胺為色譜純標樣。

2) 二氯甲烷、丙酮、乙睛等均為色譜純試劑。

3) 氫氧化na、鹽酸均為分析純試劑。

4) 無水硫酸鈉為分析純試劑，用前在馬弗爐中350烘4 h。

5) 氟羅里硅土100～200目色層分析用，進口分裝，400℃下烘2h，置干燥器中備用。

1．2 樣品制備

1．2．1 土樣預處理

將土壤樣品風干、研磨后過篩，稱取土壤20g，加適量硅藻土拌勻，填人萃取池中，若萃取池中仍有空間，則用硅藻土填滿,萃取。取下樣品萃取液，于38℃用氮吹儀進行濃縮至lmL，待凈化。

1．2．2 樣品凈化

苯胺類的預分離和濃縮：稱取含水量10％的氟羅里硅土6g，制成環巳烷漿液，濕法裝入內徑為lOmm的玻璃柱中，新裝好 的色譜柱應用二氯甲烷和丙酮沖洗數次，然后將預濃縮過的萃取液通過此玻璃柱，再用2mL的環巳烷洗K—D濃縮瓶三次并通過層析柱，用30mL二氯甲丙酮洗 脫液浸泡層析柱，再用30mL洗脫液洗脫柱中苯胺類，全部洗脫液接入氮吹瓶中于氮吹儀中濃縮定容到預定體積1mL，用Welchrom Syringe Filter Nylon 13mm 0.45um (Part Number:00802-02202,Lot Number:140108)過濾器對濃縮樣品進行過濾，將此萃取液按下面色譜分析條件進行分析測定。

1．3 色譜分析條件

流動相為70％0．05mol／L乙酸胺緩沖液加30％乙睛，流速為0．8 mL／min；紫外檢測器，鑒定波長為285 nm；進樣量10 uL。色譜柱溫l6℃。

1．4 標準曲線的繪制

首先以甲醇為溶劑將苯胺類7種單標用重量法配制，充分溶解后，再分別量取一定體積混合成中間儲備液后逐級稀釋后液濃度見表1。

表1  苯胺類各成分混標的濃度

將以上苯胺類標準液依次測定后，繪制標準曲線見表2。

                    表2 苯胺類各成分標準曲線

1．5 定性和定量計算

利用保留時間定性，利用苯胺類混合標準樣品做為外標，利用峰面積進行定量計算。

2 結果和討論

2．1 色譜條件的確定

2．1．1 流動相的選擇

因此選擇70％0．05mol／L乙酸銨緩沖液加30％乙睛做流動相。其色譜圖見圖2。

圖l 65％0．05mol／L乙酸銨緩沖液和35％ 甲醇流動相

(1一苯胺、2一鄰硝基苯胺、3一間硝基苯胺、4一對硝基苯胺、5— 2，4一二硝基苯胺、6—2，6一二硝基苯胺與7—3，5一二硝基苯胺)

圖2 70％ 乙酸銨緩沖液和30％ 乙睛流動相

(1一苯胺、2一鄰硝基苯胺、3一間硝基苯胺、4一對硝基苯胺、5— 2，4一二硝基苯胺、6—2，6一二硝基苯胺、7—3，5一二硝基苯胺)

2．1．3 柱溫的選擇

參考本地氣溫的變化規律，選擇16℃作為該色譜柱的適宜溫度。

2．1．4 準確度、精密度和檢出限

依據美國EPA SW一846中規定的方法檢出限，連續分析7個接近檢出限濃度的實驗室空白加標樣品，分別在7個20g空白土壤中加入苯胺類混標，計算其標準偏差S，再依據公式MLD=St_{( n-1,0.99)}計算出檢出限，在99％的置信區間，7個分析值的偏差均非常小，S=0.012-0.032，此時，t_{（6．0．99)}=3.143，其中，為

t_{( n-1,0.99)}是置信度為99％、自由度為n一1時的t值；其中n為重復分析的樣品數。

經實驗確定，取7個20g空白土壤，分別進行7次低濃度加標回收測定，加標量為表1中濃度按苯胺類混標100uL的平均加標回收率為63.8％ -92.7％，相對標準偏差(RSD)≤4．8％。其檢出限與回收率結果見表3。