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  • 發布時間:2020-04-24 17:11 原文鏈接: 液相色譜拖尾怎么辦

      首先找到峰拖尾的原因:

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       色譜柱本身被污染,或者塌陷;

       儀器柱外死體積太大。柱體積越小,柱效越高的色譜柱受柱外死體積影響越大;

       目標物本身的化學性質導致,一般堿性或極性的目標物和填料上的非特異性吸附位點互相作用。

      過載或柱外展寬導致的:

       觀察色譜圖,可以得到很多信息,觀察峰高,如果是UV檢測器,峰高在1000mAμ的數量級以上,那么可能是過載造成的峰形拖尾,通常情況下,120A左右孔徑的多孔填料,上樣量在100μg時就會出現過載導致的峰形不好,這時可能峰高不是很高,可以進樣1/10量來判斷,重復進樣一次;

       根據高低濃度的譜圖,觀察多個化合物的峰形是否大致不變,或者有相同情況的改變,由于峰寬的增加能抵消柱外死體積引起的峰形異常(有可能是前延峰有可能是拖尾峰),那出峰時間越長的峰,峰形越好,那么可能是柱外死體積導致的,柱外死體積考慮兩種情況:

       額外的主展寬效應

       連接管路,進樣器、檢測器流通池的擴散展寬會導致在色譜圖上先出的峰異常,把細內徑的色譜柱用在一臺常規的分析儀器上,或者最近重新連接過系統,就有可能是這種情況。如果是后一種情況,檢查所有的管路長度,內徑,是否符合該類型儀器。鏈接端是否完好(不同色譜柱儀器制造商會使用不同深度的接口,在使用金屬件鏈接時尤其要注意),對于接口影響有一個偏離標準,僅僅15μl偏差在5μm的色譜柱上流經3ml提及的流動相就能明顯影響到色譜峰形;

       工作站采集常數(通常工作站上可以設置采集頻率)

       工作站的采集頻率會影響到峰形,出峰較早的峰形更差,一般工作站設置的采集數是在1秒,出峰很快,峰形很尖銳,需要增加采集頻率以避免色譜峰“失真”。

      色譜圖中所有的峰形都出現十分明顯且相同程度的拖尾,那可能是以下原因導致的:

       柱床損壞;

       按照廠商出廠檢測的方法進行色譜柱檢測,如果仍然是相同的峰形,可以采取一些合適的溶劑沖洗(參考色譜柱異常沖洗流程),沖洗后按照出廠檢測方法仍然沒有改善,那就是色譜柱柱床本身變化,那就沒有辦法修復。如果沖洗后出廠檢測符合出廠標準,那可以再檢測之前的項目,有可能出現之前的項目峰形仍然不能改善的情況,說明該填料受到強保留物質的改性對該項目有影響,可以用于別的項目(強烈要求不能用于新項目的方法開發)。

       所有的樣品組成都有相同的化學性質;

       有一些峰正常,有一些特定的結構式的峰形異常,那就是特定的化學性質導致的,最常見的就是堿性物質與填料表面的硅羥基發生了強的相互作用,而導致拖尾;還有就是具有螯合官能團的目標物與硅膠表面的金屬離子發生螯合作用引起拖尾。

      怎么消除這些拖尾?

      針對第一種情況,方法不能改變建議選擇一款專門為堿性化合物而設計的反相填料;方法能調整,建議增加一定比例的三乙胺,辛胺,四丁基鹽等,降低流動相的pH值到3以下。


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