液相色譜法的分離原理

　　　　液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法（NPC）和反相色譜法（RPC）。　　反相色譜法　　一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、異丙醇、乙腈、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛，據統計，它占整個HPLC應用的80%左右。　　隨著柱填料的快速發展，反相色譜法的應用范圍逐漸擴大，現已應用于某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離，常用緩沖液控制流動相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5（2~8），太高的pH值會使硅膠溶解，太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH1.5~10范圍操作。　　正相色譜法　　采用極性固定相；流動相為相對非極性的疏水性溶劑，常加入乙醇、四氫呋喃、異丙醇、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。