液相色譜法如何用于藥物分析？

    液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。如今，該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。尤其是在藥物分析領域，有著廣泛的應用。
 

　　液相色譜在藥物分析中的應用，主要考慮試樣的預處理和分析柱、檢測器的選擇。在試樣的預處理上，日前興起的固相(微)萃取使得許多含量低的成分得到精制提純，從而適于液相色譜的測定。中藥中有些紫外吸收，或無特征紫外吸收的成分，直接用液相色譜測定，其靈敏度和分離度都不盡人意，利用柱前或柱后衍生化法可使這些成分較地測定出來。對于極性大、脂溶性差物質，在YWGCl8柱上不易保留，用十二烷基磺酸鈉作為離子對試劑，降低其極性，延長柱上的保留時間，取得較好的分離較果。
 

　　將液相色譜和質譜這兩個強有力的分析技術在線連接在一起，經過三十年的發展已成為一項較為成熟的分析手段，但是它從形成伊始就存在著問題：從液相色譜流進質譜時，流動相的變化、溶劑的組成、高溫高壓離子化的問題制約著這種聯用技術發展。大氣壓離子化接口具有去除溶劑和離子化的雙重功效，它的引入使得該技術在各個領域得到了廣泛的應用。電噴霧離子源是一種軟電離技術，一般只生成(M H) 和(M-H)-兩種分子離子峰，選擇性監測(mz)190的負分子離子峰，具有較高的靈敏度、準確度、專一性，滿足了低濃度藥物研究的需求。
 

　　三維液相色譜法可以同步測定葛根素和阿魏酸兩種指標。通過實驗證明：如果選擇合適的柱溫等色譜條件，乙醇作為反相液相色譜流動相，分析中藥及中成藥中有效成分，既安全又準確。結構相似的物質，普通的檢測器難以檢測出來，液相色譜-電化學法可以有效地測定黃連粉中僅差一個基團的黃芩苷和黃芩素的含量。樣品經色譜柱分離后收集，再經熒光分光光度計測熒光強度，影響因素多，測定復雜。改進后的液相色譜-熒光法則可以不經衍生化和收集分離物，只經化學處理除雜，濃縮后直接進樣即可。用該法測定貫葉連翹中金絲桃素的含量也取得了較好的結果。液相色譜-示差折光測黃芪精口服液中黃芪甲苷的含量也都取得了較為滿意的結果。對于只有紫外末端吸收，用紫外檢測時靈敏度低，基線易漂移，示差折光檢測其易受外界條件干擾，蒸發散射檢測器能克服以上不足，響應值只與樣品質量有關，其信號相應與質量成正比，不同化合物，質量相同則信號相應基本一致。蒸發光散射檢測法是基于不揮發樣品分子對光的散射程度與其質量成正比，與其所含基團性質無關。只要選擇適當的檢測器參數，便可使流動相和溶劑完全氣化，不產生信號，而樣品中的各個組分以不揮發粒子存在，對光有散射，以被檢測出來。因此，蒸發光散射檢測器可用于含不同基團的多組分同時分離、分析。和紫外、熒光等方法相比，蒸發光散射檢測法對不同物質有近似相同的響應因子。
 

　　在談到藥用輔料檢測中的其他液相色譜檢測方法時，液相色譜-電感耦合等離子體質譜聯用技術作為微量元素測定的有效途徑之一，液相色譜高分離度與電感耦合等離子體質譜低檢測性、寬動態線性范圍及能同時測定多種元素、跟蹤元素的變化等特點融合，目前已廣泛的用于食品、環境、體內外藥物分析中微量元素的測定。該方法應用于藥用輔料中微量元素砷、汞、鉻等檢測的探索性研究項目已在試驗室開展。目前雖罕見相關報道，隨著技術的成熟與儀器的發展，其在藥用輔料檢測中有著廣泛的應用前景。同時，液相色譜-核磁共振聯用技術因儀器昂貴，核磁共振靈敏度相對較低，液相色譜需使用氘代溶劑，溶劑信號易對樣品產生干擾等，使其在藥物分析中廣泛應用存在一定障礙，但核磁共振在結構分析方面有獨特的優勢，能夠提供豐富的結構信息，彌補液相色譜通用檢測器只能得到非常有限的結構信息的不足，在實際藥用輔料雜質分析中已進入使用階段。
 

　　綜合上述研究成果可以知曉，目前液相色譜法在藥物分析領域的應用是多方面的。而且為了滿足特定的檢測需求，液相色譜與多種其他方法、其他儀器聯合，不斷改進自身缺陷，為藥物分析提供更佳的解決方案。相信這項技術在未來還會有更廣闊的應用空間。