淋巴細胞的分離和激化

全血

肝素 葡聚糖 PBS Ficoll-Hypaque

離心機

1. 收集 10 ml 全血，加入不含防腐劑的肝素（0.2 ml 肝素/10 ml 全血）。

2. 在 15 ml 離心管中的肝素化血中加入 1 ml 6%葡聚糖，室溫放置 20~30 分鐘，沉降紅細胞。

3. 從葡聚糖處理的血中小心收集紅細胞上層的富含白細胞的血漿。

4. 富含白細胞的血漿室溫 300 g 離心 8 分鐘，沉降細胞。

5. 棄上清，細胞輕懸于 1 ml PBS 中。

6. 于室溫下，用無菌巴斯德吸管小心將細胞懸液加在 5 ml Ficoll-Hypaque 之上。

7. 400 g 低溫（4℃）離心 30 分鐘，沉淀細胞。

8. 淋巴細胞在血漿和 Ficoll-Hypaque 層之間的白色渾濁條帶中，小心取出貯存。棄紅細胞沉淀。

9. 5 ml PBS 洗一次細胞，室溫 250 g 離心 5 分鐘，沉淀細胞懸于 3~5 ml 生長培養基中。

10. 全部細胞懸液轉移至 T-25 組織培養瓶，加促細胞分裂劑。