溶酶體的分離

溶酶體是由一層單位膜包圍，內含多種酸性水解酶的泡狀結構。溶酶體含有40多種水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對細胞內物質的消化作用。此外溶酶體與器官形成、激素分泌的調節以及某些疾病的發生密切相關。可采用如下方法分離獲得。

1.制備蔗糖梯度溶液：取帶有兩個小杯的梯度混合器，兩個小杯分別裝入117ml 2.1mol/L蔗糖和13ml 1.1mol/L的蔗糖；

2.將大鼠處死取出腎臟，以1:8（重量/體積）比例加入0.3mol/L蔗糖，然后在玻璃勻漿器中勻漿腎臟組織；

3.以150g ×10min離心，棄沉淀，取上清液，9000g×3min離心，棄上清液，取沉淀；

4.沉淀從上至下依次為白色、黃褐色、暗褐色三種不同顏色層，上層為膜成分的混合物，中層為線粒體部分，最底層則為半純化的溶酶體。先用吸管小心吸掉上層，然后沿管壁加入幾毫升0.3mol/L蔗糖，慢慢搖管使界面層懸浮起來棄之。用0.3mol/L蔗糖洗滌1次，底層溶酶體部分懸浮在2.5ml 0.3mol/L蔗糖中；

5.將2ml懸浮的半純化的溶酶體鋪在蔗糖梯度上面，用玻璃棒攪動最上層的梯度，使梯度和溶酶體之間的界面破壞，然后100000g×150min離心，離心結果可見：梯度溶液分3條明顯的帶和較少的沉淀。最下層的暗黃色到褐色的帶即為純化的溶酶體。以上所有操作需在0~4℃下進行。