焦磷酸測序（Pyrosequencing）實驗技術及方法

先進的基于焦磷酸測序（Pyrosequencing）的PSQ96 MA技術平臺，能提供基于序列測定的SNP檢測、等位基因頻率分析和甲基化檢測服務。另外，還提供短片段的測序服務（50-100 bp），適用于細菌和病毒分型等研究領域。

基于Pyrosequencing的SNP分析具有快速、高通量的特點，完成96個樣品的SNP分析僅需10分鐘。整個實驗過程（包括PCR擴增、單鏈分離、Pyrosequencing測序和數據分析）也只需3-4 小時。

PSQ96 MA配備有功能強大的SNP分析軟件，可支持SNP位點的復合檢測（在一個反應體系中最多可同時檢測3個不同位置的SNP位點）。對于混合樣品，則可準確測定特定SNP位點的基因型頻率。

一．常規SNP檢測

樣品要求

用戶須提供足夠量的基因組DNA樣品，一般需200ng/樣品/位點。

二．基于Pyrosequencing技術的甲基化檢測服務

1．甲基化研究意義

DNA甲基化是最早發現的基因表觀修飾方式之一,可能存在于所有高等生物中。DNA甲基化能關閉某些基因的活性，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。,真核生物中甲基化的主要形式是在DNA甲基化轉移酶（DNMTs）的作用下，使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶轉變為5'-甲基胞嘧啶。這種DNA修飾方式并沒有改變基因序列，但是它參入了基因的表達調控。DNA甲基化在維持正常細胞功能、遺傳印記、胚胎發育以及腫瘤發生過程中起著極其重要的作用。

2．基本流程：

通過亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，使其中未甲基化的C轉變成T后，運用特異性引物擴增目的區段，然后用Pyrosequencing技術測定目標位點中 C/T的比率，以此判斷目標位點的甲基化程度。