現在國內檢測蛋白質用什么方法

目前食品中蛋白質的測定方法有蛋白質自動分析儀，近紅外自動測定儀，紫外分光光度法以及凱氏定氮法等。本文采用納氏試劑作為顯色劑測定食品中蛋白質含量，適用范圍廣，可用于各類食品及保健食品的檢測。用本法對標準品、質控樣品進行測定獲得滿意結果，對批量樣品的快速測定更具有實用性。現將結果報告如下。

材料與方法

儀器與試劑 WFZ800-D3型紫外分光光度計(北京第二光學儀器廠)。分析純硫酸、硫酸銅、硫酸鉀。(1)納氏試劑：稱取碘化汞100g及碘化鉀70g，溶于少量無氨蒸餾水中，將此溶液緩緩傾入己冷卻的32%氫氧化鈉溶液500ml中，并不停攪拌，再用蒸餾水稀釋至1L，貯于棕色瓶中，用橡皮塞塞緊，避光保存。(2)硫酸銨標準儲備溶液(1.0g/L)：精確稱取經硫酸干燥的硫酸銨0.4720g，加水溶解后移入100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，混均此液每毫升相當于1.0mgNH3-N(10℃下冰箱內儲存穩定1年以上)。(3)硫酸銨標準使用溶液(0.01g/L)：用移液管精密吸取1.0ml標準儲備液(1.0g/L)于100ml容量瓶內，加水稀釋至刻度，混勻，此溶液每毫升相當于10.0μg NH3-N。

方法

標準曲線繪制 取25ml比色管7支，分別準確吸取0.01g/L硫酸銨標準使用液0.00，0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，10.0ml(相當于標準0.0，5.0，10.0，30.0，50.0，70.0，100.0μg)，加水至10ml刻度，于標準系列管中各加2ml納氏試劑，混勻后放置10min，移入1cm比色皿內，以零管為參比，于波長420mm處測量吸光度，以標準管含量為橫坐標(μg),對應的吸光度(A)值為縱坐標繪制標準曲線。

樣品測定 選擇牛奶和奶粉為檢測樣品。精密稱取樣品0.1～2.0g置于250ml三角瓶中，加入0.2gCuSO4、1.0gK2SO4、硫酸10ml，先小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫停止后，加大火力至液體呈藍色，使H2SO4剩余量約為3ml左右為止，室溫放冷后，沿瓶壁慢慢加入10ml水，移入100ml容量瓶中，用少量蒸鎦水洗三角瓶3次，洗液全部并入容量瓶中，冷卻，加蒸餾水至刻度，混勻。測定時取0.5ml，加水至10ml刻度，以后操作同標準曲線。同時做空白試驗。

計算公式

X=c×Fm×V2V1×1000×1000×1000

式中：X-試樣中蛋白質含量(g/100g或g/100ml)

C-試樣測定液中扣除空白后氮的含量(μg)

V1-試樣消化液定容體積(ml)

V2-測定用消化液體積(ml)

m-樣品質量(g)或體積(ml)

F-氮換算為蛋白質的系數。

蛋白質的氮含量一般為15%～17.6%，按16%計算乘以6.25即為蛋白質，乳制品為6.38，面粉為5.7，肉及肉制品為6.25，大豆為5.71。

結果

2.1 測定波長選擇 含氮量為30μg的標準管在顯色后，在波長400～440mm范圍內每間隔5nm進行測定，最大吸收波長為420mm。

顯色劑用量選擇 含氮量為30μg的標準管分別加入不同量的納氏試劑，在420mm的波長下分別測定其吸光度結果。納氏試劑顯色劑加入量為1.5～3.0ml時吸光度基本無變化，本法選擇加入納氏試劑2.0ml。

顯色時間及穩定性 含氮量為30μg的標準管經顯色后，分別在10，30min，1，2，4，8h進行測定。顯色后10min～8h內吸光度穩定無變化。本法選顯色10min后測定。

標準曲線 回歸方程：y=0.016X-1.5×10-3，r=0.9998，最佳線性范圍0.0～100μg。

精密度 牛乳和奶粉2種樣品分別取6份按本法重復測定6次，牛乳和奶粉精密度測定結果：平均數分別為3.06，23.50；標準差分別為±0.029，±0.073；相對標準偏差分別為0.31%，0.94%。

對2種樣品利用標準加入法作回收試驗(表1) 結果可見，回收率為95.50%～99.44%。

2種方法測定結果比較 分別用GB/T5009.5-2003凱氏定氮法與本法測定。結果顯示，2種分析方法的測定結果差異無統計學意義(t=0.026，P>0.05)。

測定標準物質 用本法測定4種不同的蛋白質標準物質，測定結果與標準物質含量一致。

以納氏試劑作為顯色劑快速測定食品中蛋白質的方法特點簡單、快速，適用于批量樣品測定。在堿性條件下NH3-N與納氏試劑反應生成的黃色化合物穩定。本法與國標凱氏定氮法進行比較t=0.026,P<0.05，n=32，2種方法測定結果無明顯差異。測定范圍廣，線性范圍寬0.0～100.0μg；精密度高；相對標準偏差為0.31%～0.94%；回收率好，加標回標率為95.50%～99.44%。用本法測定標準物質結果一致，用于質量控制樣本測定結果滿意。本法儀器試劑簡單，易于基層普及，有利于推廣應用。