球蟲卵囊基因組提取

實驗概要

卵囊基因組的提取是在基因層面研究球蟲生理活動功能的前提。

主要試劑

2×CTAB 溶液配制：

10ml 1M Tris-HCl(pH7.5或8.0)

2g CTAB

28ml 5M NaCl

4ml 0.5M EDTA(pH 7.5 或8.0)

1g亞硫酸氫鈉

加雙蒸水至100ml

實驗步驟

1.   先將卵囊沉淀投入液氮速凍2-3分鐘，向研缽中倒入少量液氮預冷研缽（投入液氮前，EP管中沉淀需合適量，盡量積聚在管底，量太多不易將凍塊敲出來（200   -300μl左右合適））用鑷子夾出液氮中的EP管，打開管蓋，敲出沉淀塊，向研缽中加入液氮研磨至沉淀為粉末狀。研磨過程中，液氮干的時間不應太長，否則DNA降解嚴重。

2. 將研磨后的組織粉末加入EP管中至約1/3管。

3. 加入1ml 2×CTAB 于60℃水浴過夜孵育。

4. 12000rpm離心5分鐘，將上清移至新管。

5. 加入等體積苯酚/氯仿/異戊醇（25:24:1），振蕩混勻10秒。

6. 12000rpm離心5分鐘。

7. 將上層水相移至新管，加入等體積氯仿/異戊醇（24:1），振蕩混勻10秒，12000rpm離心5分鐘。

8. 將上層水相移至新管，加入等體異丙醇，混勻后于-20℃靜置20分鐘。

9. 12000rpm離心10分鐘，棄上清。

10. 加入1ml 70%乙醇洗滌沉淀，12000rpm離心3分鐘，棄上清。

11. 室溫晾干沉淀10分鐘。

12. 用含RNAse（20μg/ml）的雙蒸水溶解沉淀，37℃搖床孵育30分鐘。

13. 跑電泳檢測提取效果。