生物顯微鏡激光掃描共聚焦顯微鏡概述

生物顯微鏡--激光掃描共聚焦顯微鏡概述

激光掃描共聚焦顯微鏡（laser sconningconfocal microscope,LSCM）在生物醫學領域的主要應用是通過一種或多種熒光探針標記后可對固定的組織或活體標本進行觀察研究。當這些標本用普通熒光光學顯微鏡觀察時，來自焦點以外的其他區域的熒光對結構的分辨率干擾較大，尤其是標本的厚度在2Pm以上時，其影響更為明顯（圖l—1）。共聚焦方法可排除“焦點以外”熒光的干擾使側向和軸向分辨率提高。LSCM的分辨率比普通寬視野光學顯微鏡的分辨率高（zui大理論分辨率為o．2μm），透射電子顯微鏡的分辨率可達到0．1nm。因此，略CM在這兩種zui常用的形態學技術間架起了橋梁。

生物顯微鏡--激光掃描共聚焦顯微鏡概述

    LSCM的成像方法與普通寬視野光學顯微鏡不同，在普通寬視野光學顯微鏡中，整個標本全部都被水銀弧光燈或佩燈的光線照明．圖像可用肉眼直接觀察。而共聚焦通過1柬或多束聚焦的光線對標本進行掃描．使共聚焦顯微鏡獲得照明，光源通常為激光，以這種方式掃指標本所得的圖緣稱為光學切片（面）。這種因像的采集方法是通過儀器進行的一種無損傷性的方法，它使用光線而不是使用機械方式完成對標本的切片。共聚焦方法適用于活細胞標本的圖像采集，并以z掃描的方式自動完成三維（3D）數據的采集．改善多標記標本的圖像質量。

LSCM在生物醫學領域的應用越來越廣泛，成為許多研究人員的儀器。但對于許多*次接觸15cM的初學者．可能會遇到許多問題，因此本書著重講述15cM在具體應用時應注意的事項、使用技巧、適用范圍等。在生物學成份領域中有各種型號的共聚焦顯微鏡，結構原理基本相同，本書所描述的各種操作步驟、樣品制備的方法基本部可在其他儀器使用。同時可通過其他技術獲得更好的光學切片，包括去眷積（deconvolution））技術和多光子成像技術。