用甲酰胺從哺乳動物細胞中分離高分子質量DNA

λ 噬菌體的線性單體和多聯體 哺乳類細胞 新鮮組織 血樣

透析緩沖液 甲酰胺變性緩沖液 TE

脈沖電場凝膠或 0.6% 瓊脂糖凝膠 帶有不銹鋼杯的攪拌器 火棉膠袋 尖頭去除的黃色尖頭 透析管夾 玻璃棒 水浴或孵箱

一、材料

1. 緩沖液和溶液

透析緩沖液 1（20 mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)，0.1 moI/L NaCl，10 mmol/L EDTA ( pH 8.0)，制備 6 L 透析緩沖液 1，儲于 4℃。）

透析緩沖液 2（10 mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)，10 mmol/L NaCl，0.5 mmol/L EDTA ( pH 8.0)，制備 6 L 透析緩沖液 2，儲于 4℃。）

甲酰胺變性緩沖液（20 mmol/L Tris-Cl ( pH 8.0)，0.8 mol/L NaCI，80% (V/V) 甲酰胺）

TE ( pH 8.0)

2. 凝膠

脈沖電場凝膠或 0.6% 瓊脂糖凝膠

3. 核酸和寡核苷酸

λ 噬菌體的線性單體和多聯體

4. 專用設備

帶有不銹鋼杯的攪拌器（用于組織）

火棉膠袋

尖頭去除的黃色尖頭

透析管夾

玻璃棒

預置于 15℃ 的水浴或孵箱

預罝于 50℃ 的水浴

5. 細胞和組織

單層或懸浮培養的哺乳類細胞，或新鮮組織，或血樣

二、方法

1. 采用方案 1 步驟 1~4 制備細胞懸液（或冰凍細胞粉末）的裂解液。

2. 將含有裂解細胞和裂解緩沖液的溶液冷卻至 15℃。每 1 ml 細胞裂解液加 1.25 ml 甲酰胺變性緩沖液，用玻璃棒溫和地混勻溶液。將溶液在 15℃ 放置 12 h。

3. 將黏滯的溶液灌入一個或者多個火棉膠袋中。透析袋開口用透析管夾封住，在 4℃ 于 2 L 裂解緩沖液 1 中透析 45 min。換新鮮緩沖液 1 并繼續透析至少 4 h 后，再換 2 L 新鮮透析緩沖液 1 透析另外 4 h。將 DNA 在 2 L 新鮮透析緩沖液 2 中透析 3 次，每次至少 4 h。

4. 測定 DNA 的濃度。

5. 脈沖凝膠電泳或者常規的 0.6% 瓊脂糖凝膠電泳。用 λDNA 單體或者線性多聯體作為分子質量標記。基因組 DNA 大小將超過 200 kb。