甲基化和異戊烯化作用的檢測實驗

蛋白

牛血清白蛋白 氫氧化氨

試管

1. SDS-PAGE 和電洗脫分離目的蛋白。

2. 洗脫的蛋白中加牛血清白蛋白載體使最終濃度為 0.1 mg/ml，并用 5 倍體積的含 1.5% 氫氧化氨的冰冷丙酮處理 30 分鐘以沉淀蛋白。

3. 離心收集沉淀蛋白，倒掉上清，在真空下干躁沉淀物。

4. 在 0.4 ml 的乙醇：甲酸（4:1 ) 溶液中重懸蛋白，并轉到一個帶玻璃螺絲帽的試管中。



5. 加 0.1 ml 的拉尼鎳混合液（Aldrich），然后加 1 ml 水飽和戊烷。

6. 用 Teflon 帶繞細線封緊試管，并用 Teflon 線擰上一個帽。

7. 在 100℃ 熱塊上加熱試管過夜。

8. 取出頂層保存在一個新試管中，然后再用 1 毫升戊烷再次抽提底層。

9. 收集戊烷層于圓錐型樣品瓶中，在鹽水冰浴中蒸發到干燥。

10. 用 100~200 μl 的己烷清洗試管的側壁，將己烷溶液倒入一個干凈的錐形樣品瓶中，并且蒸發至較少的體積（10~20 μl）。

11. 通過放射氣相液體色譜法分析樣品，使用 15 m、DB-5、中等極性的百萬孔的柱子去分離并按照下列條件走柱：

后始溫度，100℃；啟始時間，4 分鐘；速率，每分鐘 10°。最終溫度，300℃；最終時間，1 分鐘。