病毒的培養方法實驗

實驗方法原理 雞胚培養方法操作簡便，適用于流感病毒，痘病毒，皰疹病毒和腦炎病毒等的培養。最常用的雞胚接種方法有四種，即絨毛尿囊膜接種法，羊膜腔（羊水囊）接種法，尿囊腔接種法和卵黃囊接種法。根據不同病毒和不同目的采用適宜的接種方法。

實驗步驟

1.  雞胚的檢查

將9～11 日齡雞胚置于檢卵器上，照視觀察雞胚是否生活，根據①小血管是否清晰；②胚胎是否活動，觀察小雞的眼睛黑點是否移動。如果雞胚不動，血管昏暗模糊，變黑或蒼白都表示已死亡。

2.  接種

用鉛筆標明天然氣室及雞胚位置，然后在絨毛尿囊膜發育區〈照視時呈現紅色〉近胚位處的氣室邊緣作一記號，定為注射入口。

用碘酒消毒注射入口和天然氣室端的蛋殼，再用電鉆，口腔科用牙鉆和小銼刀，于注射入口和天然氣室端的蛋殼上鋸一小孔，勿傷及卵膜。

用大頭針通過火焰消毒后刺穿氣室端所開小孔的卵膜，這樣可避免在注射時液體回流出來。

將雞胚橫臥于蛋架上，用無菌l 毫升注射器抽取病毒液體，針頭與卵殼成30（交角，由注射器小孔剌入0.5～1.0 厘米，注0.1～0.2 毫升。

注射完畢，用膠布封口，封口前膠布用碘酒消毒，并通過火焰燒去余碘，用過的注射器用煮沸法消毒，雞胚放入35～37 ℃培養。

注射后次日，逐日觀察雞胚生活情況，孵育48～72小時后移入4℃冰箱過夜。注意雞胚必須直立，令氣室端朝上。

收獲尿囊液之前取出雞胚，用碘酒消毒氣室端，并將鑷子擊破氣室端卵殼，沿氣室邊緣小心打開一大缺口，然后用小鑷子撕去卵膜及撕破絨毛尿囊膜，最后用毛細管吸取尿囊液，一般可吸得4～5 毫升。

滴定尿囊液的病毒血凝效價。

注意事項

尿囊接種法適用于某些呼吸道病毒如流感，副流感，新城雞瘟等病毒之培養，唯分離培養不如羊膜腔接種法的陽性率高。