實驗方法原理
實驗材料 全血
試劑、試劑盒 裂解緩沖液 A裂解緩沖液 B蛋白酶 K
儀器、耗材 離心機水浴鍋
實驗步驟
1. 在 750μl 全血中加入等量裂解緩沖液 A,混勻， 12000 r/min 離心 30 s, 棄上清液。
2. 用 1.5mL 裂解緩沖液 A 懸起沉淀，再重復離心 1次，棄上清液。
3. 用 117μL 裂解緩沖液 B 溶解沉淀， 70℃作用 5 min, 待冷卻至 55℃時加入3μL 蛋白酶 K, 并保溫1h 消化細胞， 95℃ 10 min 滅活蛋白酶 K 。
4. 加入 2 mol/L 的 KCL 溶液 30μL, 冰溶 5 min 。
5. 12000 r/min 離心 5 min, 棄上清液做 DNA 模板。即獲得病毒DNA。
注意事項
其他
1. 裂解緩沖液 A 由 320 mmol/L蔗糖、 10 mmol/L Tris-HCl(pH 7.6) 、 5mmol/L MgCl2和1% Triton-X-100 組成。
2. 裂解緩沖液 B由10 mmol/L Tris-HCl(pH 7.6) 、 1% SDS 組成。
3. 蛋白酶 K(25 mg/ml) ,ddH2O配制,-20℃保存。
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