近年來,研究發現在絕大多數癌癥中端粒酶活性與惡性腫瘤之間存在著較大的關聯,因而對端粒酶的酶活性檢測可為癌癥的診斷、預測以及臨床治療提供重要依據。酶活性測定法是利用酶能專一而高效地催化化學反應的性質,通過測定酶促反應速度來檢知體液等生物樣品中某種酶的含量和活性的分析技術,美迪西提供酶活性檢測服務。
發展細胞內各種酶的高靈敏檢測新方法,在疾病的早期診斷等方面具有重要的科學研究意義。端粒,是細胞染色體末端的一種特殊結構,其作用是保持染色體的完整性。細胞每分裂一次,染色體的端粒就縮短一次,當端粒不能再縮短時,細胞就無法繼續分裂,達到分裂極限并開始死亡。因此,端粒被科學家們視為“生命時鐘”。 端粒酶是一種細胞中負責端粒的延長的酶,它可以把DNA復制的缺陷填補起來,藉由把端粒修復延長,可以讓端粒不會因細胞分裂而有所損耗,使得細胞分裂的次數增加。
科學家們認為,端粒的縮短和很多疾病的發病直接相關。而且有許多研究表明,基因突變、腫瘤形成時,人體的端粒可表現出缺失、融合或序列縮短等現象;在一些癌細胞中,端粒酶的活性會增加,其與端粒之間有著某種聯系,因此這些癌細胞可以分裂很多次。在某些特定的癌細胞中,如果阻斷端粒酶的功能的話,端粒就會變短,癌細胞就會死亡,所以深入研究端粒和端粒酶的變化,是目前腫瘤研究的一個新領域。
在正常的人體細胞中,端粒程序性的縮短,限制了細胞的生長能力,端粒酶的重新表達在細胞的永生化及癌變過程中起著重要作用。因此,有人認為,端粒酶活性正常表達的細胞更易癌變。在測定端粒酶活性時發現,90%以上的正常組織細胞的端粒酶呈陰性,從而將這個酶與細胞的永生化和腫瘤聯系到一起。由于此種情況,對端粒酶活化、診斷和抑制具有重要的臨床價值。
端粒酶酶活性檢測基本原理
端粒酶在體外可以以其自身rna的模板區為模板,在適宜的寡核苷酸鏈的末端添加6個堿基的重復序列,用聚丙烯酰胺(page)凝膠電泳可顯示6個堿基差異的梯帶。1994年kim建立了基于pcr基礎上的端粒重復序列擴增法,首先合成一個18nt的ts做上游引物,端粒酶結合ts末端的gtt并合成agggttag,然后每經過一次轉位合成一個ggttag的6堿基重復序列,端粒酶滅活后,加入一個24nt的cx做下游引物,經過多次變性-退火-延伸,擴增端粒酶延伸產物。
端粒酶可以作為一種腫瘤標志物,發展快速、高靈敏的端粒酶活性檢測新方法,開展酶活性檢測服務對癌癥的早期診斷和治療具有重要的研究價值。
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