原發性肝癌(primary liver cancer,PLC)是一種常見的高度惡性腫瘤,其全球發病率逐年增長,在腫瘤相關死亡原因中位居第2位。而肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在原發性肝癌中占比接近90%,全世界每年有超過70萬人死于肝細胞癌,僅我國就占了死亡總數的50%。雖然診療水平不斷提高,但高復發率及轉移率仍嚴重影響患者預后。
重慶醫科大學附屬第二醫院鄒敏等通過差速超速離心提取缺氧條件下Huh7細胞分泌的缺氧外泌體,利用透射電鏡、納米顆粒跟蹤分析以及Western blot實驗來鑒定缺氧外泌體。將缺氧外泌體與Huh7細胞在常氧下共培養后,分別采用CCK8、細胞劃痕、Transwell小室實驗檢測細胞增殖、遷移及侵襲能力的變化。采用單因素方差分析和t檢驗進行統計學分析。
結果發現:缺氧的Huh7細胞分泌的外泌體大小在30~150 nm之間,且表達有外泌體表面標志物CD9、CD63和TSG101。缺氧外泌體可顯著增強常氧Huh7細胞的增殖(48 h:缺氧外泌體組與對照組A值分別為2.131±0.092與1.760±0.104,t = 3.740,P < 0.01;72 h:缺氧外泌體組與對照組A值分別為3.121±0.157與2.298±0.085,t = 8.289,P < 0.01)、遷移[24 h:缺氧外泌體組與對照組的遷移距離分別為(0.37±0.06)cm與(0.19±0.05)cm,t = 4.813,P < 0.05;48 h:缺氧外泌體組與對照組的遷移距離分別為(1.15±0.07)cm與(0.62±0.08)cm,t = 8.874,P < 0.05]及侵襲能力[缺氧外泌體組(123±18)個與對照組(44±12)個,t = 6.203,P < 0.01]。
這個研究發現缺氧環境下肝癌Huh7細胞分泌的外泌體可以促進Huh7細胞的增殖、遷移及侵襲,提示缺氧外泌體介導的細胞間信息傳遞可能是肝癌缺氧微環境中腫瘤細胞惡性程度增加的關鍵機制之一。
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