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  • 發布時間:2020-04-29 15:08 原文鏈接: 研究GST標簽蛋白,原來可以這么簡單

    為什么要研究GST標簽蛋白?

    谷胱甘肽巰基轉移酶(GST)是在真核細胞中天然存在的大小26KDa的蛋白。GSTs可以催化外源性物質結合到谷胱甘肽(GSH)上,因而對諸多環境毒素包括化療藥物、殘留的藥物、除草劑及致癌物起到解毒作用。許多研究人員將GST的DNA序列整合到表達載體上來生產帶有GST標簽的融合蛋白。GST能夠快速折疊穩定并且具有良好的溶解性,因而可以促進融合蛋白的表達與溶解。此外,還可以利用GST與其底物GSH之間的結合來進行蛋白純化和檢測。目前,GST標簽蛋白被應用于多種研究技術,例如pull-down、親和層析及ELISA。為了方便廣大研究人員,Nicoya Lifesciences也推出了用于固定GST標簽蛋白的GST功能芯片,令您的表面等離子共振分析更加快速簡便。

    什么是SPR技術?

    表面等離子共振技術(SPR)可以用于分析多種類型的分子間相互作用分析,包括蛋白與蛋白、蛋白與小分子、蛋白與核酸、蛋白與適配子、蛋白與脂質、蛋白與糖類、糖類與糖類等。傳統的實驗技術如CoIP、ELISA及熒光共振能量轉移往往需要繁瑣的標記步驟或是復雜昂貴的儀器。大多數的技術僅能獲取分子間是否發生結合或親和力。近些年,越來越多的研究人員開始選擇SPR技術來對他們感興趣的生物分子間作用進行實時檢測。SPR是一種無標記分析技術,用于定量分析兩種生物分子間的相互作用。同其他技術相比,SPR不僅可以測定親和力,還可以對兩種生物分子間作用進行動力學分析,獲取結合速率與解離速率。

    SPR實驗設計中芯片選擇

    在開始SPR實驗時,您首先需要選擇適合您的SPR芯片。芯片由玻璃介質、納米金顆粒及顆粒表面的功能修飾所組成。芯片的選擇取決于您所使用的配體,即需要固定到芯片表面的分子的屬性。GST芯片可以大大簡化GST標簽蛋白的固定流程,芯片表面的谷胱甘肽(GSH)可以直接捕獲GST標簽配體以完成固定。

    使用OpenSPR GST芯片進行動力學結合分析

    下圖是使用OpenSPR GST芯片進行GST標簽蛋白的固定及動力學結合分析。GST-ubiquitin被固定在GST芯片上,使用OpenSPR儀器對Ubiqutin抗體與Ubiqutin之間的結合進行動力學分析,KD值為95.3nM。

         

    GST-ubiquitin配體固定至GST芯片

     

    Ubiqutin抗體濃度為7.4nM,22.3nM,66.7nM

    SPR技術在生命科學研究中的作用越來越重要,且在很多醫藥及醫學研究中頗受關注。擁有SPR數據的文章也躋身優秀期刊之列,相信SPR數據會讓您的Paper更加有說服力,影響力!


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