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  • 發布時間:2024-08-18 11:32 原文鏈接: 簡述基因擴增技術的基本原理

      PCR擴增DNA的原理是:先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈,然后加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物,即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段,一般需20-30個堿基對,過少則難保持與DNA單鏈的結合。引物與互補DNA結合后,以靶DNA單鏈為模板,經反鏈雜交復性(退火),在Taq DNA聚合酶的作用下以4種三磷酸脫氧核苷(dNTP)為原料按5'到3'方向將引物延伸、自動合成新的DNA鏈、使DNA重新復制成雙鏈。然后又開始第二次循環擴增。

      引物在反應中不僅起引導作用,而且起著特異性的限制擴增DNA片段范圍大小的作用。新合成的DNA鏈含有引物的互補序列,并又可作為下一輪聚合反應的模板。如此重復上述DNA模板加熱變性雙鏈解開—引物退火復性—在DNA聚合酶作用下的引物延伸的循環過程,使每次循環延伸的模板又增加1倍,亦即擴增DNA產物增加1倍,經反復循環,使靶DNA片段指數性擴增。

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