一、實驗目的
1、了解紫外可見分光光度計的結構、性能及使用方法
2、熟悉定性、定量測定的方法
二、實驗原理
紫外分光光度法（Ultraviolet
Spectrophtometry），又稱紫外吸收光譜法（ Ultraviolet Moleculor Absorption
Spectrophtometry），它是研究分子吸收190.0~1100.0nm波長范圍內的吸收光譜。紫外吸收光譜主要產生于分子價電子在電子能級間的躍遷，是研究物質電子光譜的分析方法。通過測定分子對紫外光的吸收，可以對大量的無機物和有機物進行定性和定量測定。
苯酚是一種劇毒物質，可以致癌，已經被列入有機污染物的黑名單。但在一些藥品、食品添加劑、消毒液等產品中均含有一定量的苯酚。如果其含量超標，就會產生很大的毒害作用。苯酚在紫外光區的最大吸收波長λmax=270nm。對苯酚溶液進行掃描時，在270nm處有較強的吸收峰。
定性分析時，可在相同的條件下，對標準樣品和未知樣品進行波長掃描，通過比較未知樣品和標準樣品的光譜圖對未知樣進行鑒定。在沒有標準樣品的情況下，可根據標準譜圖或有關的電子光譜數據表進行比較。
定量分析是在270nm處測定不同濃度苯酚的標準樣品的吸光值，并繪制標準曲線。再在相同的條件下測定未知樣品的吸光度值，根據標準曲線可得出未知樣中苯酚的含量。
三、儀器與試劑
1．紫外可見分光光度計
2．容量瓶（1000ml、250ml）
3．比色管（50ml）
4．吸量管（5ml、10ml）
5．苯酚（AR）
準確稱取苯酚0.010g于200ml蒸餾水中，溶解后定量轉移到1000ml的容量瓶中，作為儲備液。
于5支50ml的比色管中，用吸量管分別加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚標準溶液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻。
四、最大吸收波長的選擇
在標準系列溶液中任取一種，以水為參比，分別在波長200~300nm之間以10為間隔測定其吸收波長，在吸光度最大值附近以間隔2為單位測定，直至找到最大吸收波長。
五、標準曲線繪制
在已篩選的最大波長下，以水為參比分別測定上述標準溶液的吸光度，畫出C-A曲線，寫出回歸曲線方程。
六、苯酚濃度的測定
在相同情況下，測定其吸光度。根據回歸曲線方程計算出待測苯酚濃度。