實驗方法原理
實驗材料 0.5~1 mg 純化的基因組 DNA微球菌核酸酶(MNase)
試劑、試劑盒 核緩沖液 C0.5 mol L CaCl20.25 mol L EGTA氯仿
儀器、耗材 設置在 68℃ 的加熱器冰塊
實驗步驟
1. 取 100 ug 基因組 DNA 加入到室溫的核緩沖液 C 中,使終體積為 300 ug。準備 4~5 管此溶液。
重要提示:對于每個溶液,直到反應進行到第 4 步后再進行下一管的反應。
2. 加入 CaCl2 至終濃度為 3 mmol/L。
3. 加入 MNase 至 0.5、1、2、3 U/ml。劇烈地混合使酶均勻的分布(溶液可能有些黏稠),反應 3 min。
4. 將溶液轉移到含有 50 ul 0.25 mol/L EGTA 預熱到 68℃ 的管子中,68℃ 溫育 10 min。
5. 將管子轉移到冰塊上。
6. 在 1.2% 的小型瓊脂糖凝膠上上樣 200 ng,電泳檢測消化的程度。
7. 對于感興趣的樣品加入等體積的氯仿抽提一次。
8. DNA 的沉淀、定量和鑒定。