線性離子阱多種解離技術對阿德福韋酯雜質譜的全（一）

前言

活性藥物成分（API）和成品藥的雜質分析是藥物研發中不可或缺的一環。雜質的化學結構信息在評估毒性、改進合成途徑，以及根據目標成藥選擇最佳劑型至關重要。

為保證藥效與消費者的安全，世界各國的監管機構都制定了藥物雜質分析的指引，清楚說明基于日服用量、使用時間，和藥物靶標的限量標準。

LCMS 已經成為最常用的未知雜質分析技術。為了能在大量母藥中識別并表征痕量雜質，具有高靈敏度、高掃描速度，并且能進行多級質譜分析（MSn） 的質譜儀必不可少。

在本研究中，Sigma-Aldrich 所售的研究級阿德福韋酯（adefovir dipivoxil，ADP） 被用來作為模型化合物進行API 雜質分析。ADP 是廣泛用于慢性乙肝病毒感染的一種抗病毒處方藥。本研究中使用的LCMS 系統由Thermo Scientific AccelaTM UHPLC 以及 Velos ProTM 線性離子阱質譜儀構成。碎片信息通過結合應用 CID 與Trap-HCD 解離技術獲得。數據處理通過軟件Mass FrontierTM 完成。

分析方法

材料與試劑

阿德福韋酯（Adefovir dipivoxil，CAS# 142340-99-6）從Sigma-Aldrich 購得，產品號A9730。

乙腈和水 （Fisher）；乙酸銨（Sigma-Aldrich，產品號73594-25G-F）；甲酸（Sigma-Aldrich，產品號33015-500ml）。

樣品制備

ADP 溶液，0.5mg/mL，用1 ml 20 : 80 的乙腈和水混合溶劑溶解0.5mg ADP 獲得。

HPLC 方法

HPLC 系統：Thermo Accela 1250 泵，開放式Accela 自動進樣器及Accela PDA

色譜柱： Hypersil GOLD C18 2.1×150 mm，3 μM，

Thermo Scientific 產品號 071399

柱溫：35 ℃

流速：0.5 ml/ 分鐘

進樣體積：8 μl

流動相：A – 水，B – 乙腈，C - 100 mM 乙酸銨，用乙酸調至pH 5

梯度洗脫：

質譜方法

質譜儀：配有 HESI-II 離子源的Velos ProTM 線性離子阱離子化條件：電噴霧， 正離子模式

1. 全掃模式 m/z 120-1000 amu/ Top5 dd MS/MS，HCD NCE 35%

2. 全掃模式/ 按母離子列表dd MS2/ TOP 3 ddMS3,CID/ Trap-HCD NCE 20%

a. CID MS² / CID MS³

b. CID MS² / HCD MS³

c. HCD MS² / CID MS³

d. HCD MS² / HCD MS³