組織培養物的繼代培養

材料和設備

材料 從培養4-6周的外植體上長出的愈傷組織、叢生芽或胚狀體

超凈工作臺

培養基　N ₆ +0.5 mg/L 2,4-D  N ₆ +2 mg/L 6-BA（也可以自已設計）

三角瓶、帶有吸水紙的成套的培養皿、鑷子、解剖刀

70%酒精、95%酒精及70%的酒精棉球

酒精燈、火柴、記號筆、酒精噴壺

二、方法步驟

1 取材  在無菌室的超凈工作臺內，每次取一瓶培養物，灼燒 培養瓶 口約20 毫米處，用灼燒冷卻后的鑷子和解剖刀，取出外植體或者愈傷組織放在無菌的培養皿中。每個培養皿中約放4-6個外植體或者愈傷組織。把每塊愈傷組織分成兩、三個不小于5 mm見方的小塊。外植體下面向著中心的細胞常呈壞死狀,不適宜作繼代培養。這些壞死的部分應當與正常的部分分離并棄去。每次操作后要去掉用過的吸水紙并重新蓋上培養皿的蓋子。

2 繼代轉接  將正在發育的外植體或愈傷組織轉移到新鮮培養基上，接種方法同前。轉接后在 培養瓶 上寫明培養物、培養基、日期。長期培養的胡蘿卜組織會產生大塊愈傷組織。正在發育的愈傷組織作第一次繼代培養所用的實驗程序與以后每隔四周轉移一次建成愈傷組織系的繼代培養程序相同。

3 實驗記錄 將實驗記錄抄錄于筆記本上，注明實驗開始的日期、持續期、培養物的數目、污染數目和所作的不同處理。在四星期內，每隔一星期用肉眼觀察培養物，記錄培養物形態的變化,培養物的生長狀態、鮮重變化等，必要時作拍照記錄。