細胞和亞細胞提取物的制備實驗

合適的動物組織

二硫蘇糖醇 勻漿緩沖液A 勻漿緩沖液B 苯甲基磺酰氟

離心機 粗棉布和過濾漏斗 切刀或絞肉機 勻漿均化器

要點：所有操作均在 0~4°C 進行。

1.從動物中取出組織后，修剪并去除脂類和結締組織，然后放入預冷的勻漿緩沖液 A 中。

2.用切刀把洗好的組織切成小塊（如 1cm 方塊），或者把這些組織放在絞肉機上攪兩次。

像肝臟、大腦、腎和心臟等組織很容易在韋林攪切器中破碎，但是骨骼肌和肺則很難，所以應在勻漿之前先用家用絞肉機來絞碎。許多纖維組織，比如哺乳動物胸腺，必須在勻漿之前冰凍以利于破碎（常用 Ultra-Turrex 勻漿器）。培養的哺乳動物細胞和少量的軟組織（1~5 g)，比如腦，可以使用 Dunce 手動勻架器（Dignam,1990) 來勻漿。在所有情況下，都要 4°C 預冷勻漿器和玻璃容器，并且勻漿操作應該在冷室中進行。

3.將組織加入 3~4 倍體積的勻漿緩沖液 B 中，然后轉移到勻漿器中。

4.使用下面的方法來制備勻漿液。

Potter-Elvehjem 勻漿器：儀器設置在 500~1500r/min，勻漿組織數次，每次 5~10s。

Dounce 手動勻漿器：勻漿組織 10~20 次。

韋林攪切器：勻漿組織 3~4 次，每次 20~30s，間隔 10~15s。

5.把勻漿液倒入玻璃燒杯，把燒杯放在冰上，在 4°C 條件下溫和攪動勻漿液 30~60 min，以便充分提取蛋白。

實驗提示：勻漿過程中不要起泡。

6.4°C 條件下 10000g 離心 10~20 min，除去勻漿液中的細胞碎片和其他物質。

7.過濾漏斗中鋪兩層紗布（或加一層玻璃棉）來過濾上清，除去漂浮在表面的脂類物質。小心地擰紗布以便獲得最大量的濾液（稱為「粗提液」）。

8.盡快用適當的分離方法和分析方法處理樣品。