細胞凋亡檢測：形態學特征的檢測方法1

一、普通光學顯微鏡觀察方法
（一）蘇木素－伊紅染色（HE 染色法）
石蠟組織切片的HE染色
1、取材組織塊，經固定后，常規石蠟包埋，4μm切片。
2、切片常規用二甲苯脫蠟，經各級乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min。
3、蘇木素染色5min，自來水沖洗。
4、鹽酸乙醇分化30s（提插數下）。
5、自來水浸泡15min或溫水（約50℃）5min。
6、置伊紅液2min。
7、常規脫水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性樹脂封固。
（二）甲基綠－派諾寧染色法
1、新鮮取材組織固定液中4℃固定3～6小時。
2、直接轉入95％乙醇脫水和無水乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋。
3、切片經二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化至蒸餾水。
4、置染色液中室溫下染片約 1h 。
5、取出切片，不經水洗，用濾紙吸干多余染液。
6、插入丙酮中迅速分化。
7、轉入丙酮二甲苯（ 1 ： 1 ）稍洗。
8、 二甲苯透明 2 ～ 3 次。
9、 中性樹膠封固。
（三） Giemsa 染色
1、收集細胞（ 1 × 106 ）， PBS 洗 1 次。
2、用細胞涂片離心機制成細胞涂片。
3、甲醇固定 3 ～ 5min 。
4、入 Giemsa 稀釋染色液 15 ～ 30min ，冬天在 37 ℃溫箱中染色。
5、用磷酸鹽緩沖液分色，以鏡下控制為準。
6、涂片晾干后用中性樹膠封片。
（四）瑞氏（ Wright ）染色
1、收集細胞（ 1 × 106 ）， PBS 洗 1 次。
2、用細胞涂片離心機制成細胞涂片。
3、甲醇固定 3 ～ 5min 。
4、用 Wright 液染色 2min 。
5、入 Wright 磷酸緩沖液稀釋液 4 ～ 10min ，然后用蒸餾水沖洗。此時如果顏色較深，可 0.08 ％醋酸分化數秒鐘。
6、直立晾干后，用中性樹膠封固。