細胞外RNA提取試劑盒究竟哪家強？

　　細胞外RNA（exRNA）已成為研究界的新寵。近年來，人們在血漿或血清樣本中成功檢測到疾病相關的exRNA，使其有望成為非侵入性的生物標志物。然而，從血漿或血清中分離exRNA仍頗具挑戰性，這一方面是因為exRNA豐度低，另一方面是因為血液中的污染物會抑制PCR。

　　商品化的試劑盒能簡化和加速exRNA提取過程，已成為循環exRNA研究不可缺少的工具。然而，這些試劑盒的提取效率如何，是否能去除血漿中的污染物，是否會偏向特定的RNA，都沒有經過評估，而這類評估對于結果解釋和實驗之間的比較都很關鍵。

　　于是，美國愛因斯坦醫學院的研究人員評估了市場上7種常用的exRNA提取試劑盒，分別來自貝克曼?庫爾特、Life Technologies、Exiqon、Zymo、QIAGEN公司。他們具體評估了合成RNA的總體回收率、不同大小的合成RNA的回收能力、exRNA產量和純度，以及純化后的擴增效率。研究結果發表在《BioTechniques》7月刊上。

（圖片來自原文）

　　在評估總體回收率和大小偏向時，研究人員使用了6種合成的RNA，其長度在200-6000 nt。他們發現，所有試劑盒的回收率都在50%以上。其中，Zymo的兩款試劑盒回收率最高，在80%以上。大部分試劑盒都很好地回收了所有長度的RNA，不過miRCURY-Biofluids試劑盒在4000-6000 nt RNA上有明顯的損失。這與試劑盒分離<1000 nt RNA的說明一致。

　　為了比較試劑盒在血漿exRNA純化上的表現，研究人員利用每個試劑盒進行三次重復提取，之后利用Qubit定量。結果顯示，miRCURY-Biofluids、Quick-RNA以及mirVana試劑盒的每毫升血漿的exRNA產量都在30-40 ng，DirectZol和miRNeasy試劑盒在10 ng左右，而MagMAX試劑盒僅產生了4.1 ng exRNA。此外，RNAdvance試劑盒的產量特別高，這可能是由于裂解液污染。

　　為了評估從純化的exRNA中擴增RNA的能力，研究人員開展了RT-PCR反應，擴增hsa-miR-16、hsa-miR-150、GAPDH和ACTB。他們發現，利用miRNeasy試劑盒分離出的RNA，很容易擴增出miRNA和mRNA。不過，有些試劑盒在miRNA擴增上表現良好，但卻無法擴增mRNA；而有的試劑盒正相反，在mRNA擴增上表現良好。

　　這項研究表明，盡管這些試劑盒在回收合成RNA上的總體表現不錯（回收率≥50%），但一些表現出RNA長度的偏向。血漿的exRNA產量因試劑盒而異，但一些試劑盒可能引入污染。此外，exRNA樣品的RT-PCR擴增差異明顯，部分原因是樣品中存在抑制劑。

　　最關鍵的是，大多數試劑盒純化出的exRNA樣品都表現出特定RNA種類的擴增偏向，如Quick-RNA偏向mRNA，而DirectZol偏向miRNA。因此，作者認為，不同試劑盒在不同程度上反映了血漿exRNA的內容，相互之間難以比較。這一發現也有助于解釋為何exRNA結果缺乏重復性。