細胞DNA的提取一般用什么方法

高中：原理： 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。 2.用冷酒精提取出含雜質較少的DNA。 3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍色。方法步驟： 1．提取細胞核物質：順時針方向攪拌，稍快，稍重。 5 min 2．溶解DNA： 3．析出含DNA的黏稠物：蒸餾水300mL，逆時針方向攪拌，緩慢 4．過濾：取黏稠物 5．再溶解：順時針方向攪拌，較慢。3 min 6．過濾：取濾液。 7．提取出含雜質較少的DNA，逆時針方向攪拌，稍慢。5 min 8．DNA的鑒定：沸水浴5min 大學 DNA提取分為三個基本步驟，每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及后續步驟的不同而有區別。利用研磨或者超聲破碎細胞，并通過加入去污劑以除掉膜脂。加入蛋白酶，醋酸鹽沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉細胞內的蛋白，如與DNA結合的組蛋白。將DNA在冷乙醇或異丙醇中沉淀，因為DNA在醇中不可溶而黏在一起，這一步也能除掉鹽分。另外，目前也有利用吸附過柱的方法提取DNA的商業化試劑盒。 2.細胞的破碎細菌有堅硬的細胞壁，首先要破碎經胞。方法有三種;①機械方法：超聲波處理法、研磨法、勻漿法;②化學試劑法：用SDS處理細胞;③酶解法：加入溶菌酶或蝸牛酶，都可使細胞壁破碎。 3.DNA提取的幾種方法 (1).濃鹽法 A. 利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來. B. 也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白. 兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些. C.以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA. （2）.陰離子去污劑法; 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA （3）.苯酚抽提法：苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質，用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態（4）.水抽提法:利用核酸溶解于水的性質,將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ，80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最后在空氣中干燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.