| 實驗方法原理 | 本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術，結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0x109 細菌中獲得多至20 ug 的基因組DNA。用于PCR、Southern 印跡分析、RAPD、RFLD 等分子生物學實驗。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 細菌培養物 |
| 試劑、試劑盒 | 細菌基因組DNA試劑盒 |
| 儀器、耗材 | DNA 制備管 小量濾器 離心管 |
| 實驗步驟 |
1. 第一次使用時，在Buffer W2 中按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇并混合均勻。
2. 準備Buffer DV：取2 ml Buffer DV-A，125 ml 異丙醇，75 ml 異丁醇，加入提供的250 ml 試劑瓶中，混合均勻。 3. 4℃預冷Buffer DV。 4. 第一次使用試劑盒時，用50%甘油溶解溶菌酶，使溶菌酶濃度為50 mg/ml。 5. 第一次使用試劑盒時將隨試劑盒攜帶的RNase A 全部加入Buffer S 中，混合均勻。 6. 準備65℃水浴。 7. 檢查Buffer G-A 和Buffer G-B 是否出現沉淀，若出現沉淀，于65℃水浴加熱至沉淀完全溶解后再使用。 8. 將Eluent 或去離子水加熱至65℃有利于基因組DNA 的充分洗脫。 三、操作步驟 1. 用2 ml 離心管收集1.0x109（1 ml 菌液OD600 為1-1.5）的細菌培養物，12 000xg 離心30 s，棄盡上清。用150 ul 已加入RNase A 的Buffer S 懸浮沉淀。 * 確認RNase A 已加入Buffer S 中。 * 懸浮需均勻，不應留有小的菌塊，否則將影響溶菌效果。 2. 加入20 ul 溶菌酶貯存液，混合均勻，室溫靜置5 min。 3. 加入30 ul 0.25 M EDTA（pH 8.0），混合均勻，冰浴5 min。 4. 加入450 ul Buffer G-A,旋渦振蕩15 s，65℃水浴10 min。 5. 加入400 ul Buffer G-B 和1 ml Buffer DV（4℃預冷），用力混合，12 000xg 離心2 min。 * 請在實驗前按照實驗準備步驟2 內容，準備Buffer DV。 6. 盡可能丟棄上相，保留相間沉淀和下相。加入1 ml 4℃預冷Buffer DV，用力混合，12 000xg 離心2 min。 7. 丟棄上相，將下相轉移至濾器（濾器置于2 ml 離心管中）。12 000xg 離心1 min。 * 上相無需完全棄盡，在轉移無色下相時偶有混入的上相，可在Tip 頭內迅速分相，便于丟棄。 * 如在轉移過程中吸入少量界面沉淀，不必去除，可過濾除去。 * 有色上相務必除盡，否則將抑制DNA 結合到silica 膜上。 8. 棄濾器，在濾液中加入400 ul Buffer BV，混合均勻。 步驟9-12 可選擇離心法或負壓法 A. 負壓法 9A. 將制備管插到負壓裝置的插口上，將步驟8 中的混合液移入制備管中，開啟并調節負壓至-20-30 英寸汞柱，吸盡管中溶液。 10A. 保持負壓，加入500 ul Buffer W1，吸盡管中溶液。 11A. 保持負壓，沿管壁四周加入700 ul Buffer W2，吸盡管中溶液；以同樣的方法再用700 ul BufferW2 洗滌一次。 * 確認在Buffer W2 concentrate 中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。 * 沿管壁四周加入Buffer W2 有助于徹底沖洗沾附在管壁上的鹽份。 * 兩次用Buffer W2 沖洗能確保鹽份被完全清除，消除對酶切反應的影響。 12A. 將制備管置于一個2 ml 離心管中，12 000xg 離心1 min。 B. 離心法 9B. 將制備管置于2 ml 離心管中，將步驟8 中的混合液移入制備管中，12,000xg 離心1 min。 10B. 棄濾液，將制備管置回到原2 ml 離心管中，加入500 ul Buffer W1，12 000xg 離心1 min。 11B. 棄濾液，將制備管置回到原2 ml 離心管中，加入700 ul Buffer W2，12 000xg 離心1 min。 以同樣的方法再用700 ul Buffer W2 洗滌一次。 * 確認在Buffer W2 concentrate 中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。 * 兩次用Buffer W2 沖洗能確保鹽份被完全清除，消除對酶切反應的影響。 12B．棄濾液，將制備管置回到原2 ml 離心管中，12 000xg 離心1 min。 13. 將制備管置于另一潔凈的1.5 ml 離心管中，在silica 膜中央加100-200 ul Eluent 或去離子水，室溫靜置1 min。12 000xg 離心1 min 洗脫DNA。 * 將去離子水或Eluent 加熱至65℃將提高洗脫效率。
展開 |
| 注意事項 |
Buffer G-B、Buffer BV 和Buffer W1 含刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套和眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣服、謹防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫療咨詢。
|
| 其他 |
試劑盒組成、貯存、穩定性 1. 說明書，耗材：DNA 制備管，小量濾器，2 ml 離心管，1.5 ml 離心管。 2. RNase A：50 mg/ml，室溫保存。 3. 溶菌酶：50%甘油溶解溶菌酶，使溶菌酶濃度為50 mg/ml，-20℃密閉貯存。 4. Buffer S：細菌原生質制備液，加入RNase A 后，4℃密閉貯存。 5. 0.25M EDTA：室溫密閉貯存。 6. Buffer G-A：裂解液，室溫密閉貯存。 7. Buffer G-B：蛋白去除液，室溫密閉貯存。 8. Buffer DV-A：Buffer DV 的制備液，請參照實驗準備Buffer DV 的配制方法配制，室溫密閉貯存。 9. Buffer DV：相分離液，室溫密閉貯存。 10. Buffer BV：DNA 結合液，室溫密閉貯存。 11. Buffer W1：洗滌液，室溫密閉貯存。 12. Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇并混合均勻，室溫密閉貯存。可用100%乙醇或95%乙醇。 13. Eluent ：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室溫密閉貯存。
展開 |
標準DNA條形碼憑借通用引物適配性強和測序成本低等優勢，廣泛應用于生物多樣性保護與溯源等領域。針對近緣種、雜交頻繁及近期輻射演化的復雜類群，標準DNA條形碼因序列變異度有限，分辨率不足，難以滿足精準鑒......
美國肯塔基大學馬丁·加頓農業、食品與環境學院團隊利用一頭雌性騾子的DNA，繪制出迄今最完整的馬和驢參考基因組，使科學家能夠進一步解析過去難以測序和組裝的著絲粒、端粒等復雜DNA區域，為研究染色體功能、......
美國加州大學圣迭戈分校研究人員利用高通量DNA測序和人工智能技術，解碼了人類基因中一段名為“起始子”的關鍵DNA序列特征。這項成果為解析基因表達調控規律和預測DNA突變影響提供了新工具。相關論文發表于......
美國麻省理工學院的科學家對細菌進行改造，使其“變身”為晶體管。在此基礎上，他們將這些晶體管組合起來，制造出活性電路。團隊希望未來開發出能覆蓋植物葉子或根部的電路，以通過計算來感知并應對干旱、害蟲侵襲等......
1587年10月一個溫暖的日子，意大利托斯卡納大公弗朗切斯科·德·美第奇因高熱不治而亡。接診醫生初步判定死因是瘧疾，但很快坊間流言四起，不少人猜測他是遭心懷嫉妒的弟弟費迪南多下毒謀害。如今，全新的科學......
在國家自然科學基金項目（批準號：32125009、32430017）等資助下，西安交通大學葉凱團隊在基因組三維結構演化領域取得新進展。研究團隊創建了染色質長距離互作捕捉計算方法和跨物種分析手段，首次勾......
自21世紀初具有里程碑意義的人類基因組解碼工作完成以來，DNA測序技術迎來了爆發式發展。傳統計算機已難以滿足海量的數據與激增的算力需求，這推動人們尋求替代方案。如今，量子計算距離實用又近了一步。科學家......
迄今規模最大的古代人類DNA研究表明，人類進化在過去1萬年里明顯加快。這項由美國哈佛醫學院的群體遺傳學家DavidReich聯合主導的研究，4月15日發表于《自然》。研究人員在涵蓋歐洲和中東地區的古代......
球蟒得名于它的經典的防御姿態：它們會蜷縮成一個球狀，并將頭部緊緊收起。然而，它們的鱗片之下還隱藏著另一種遠為精妙的防御機制：一種能夠抑制細菌積聚的微觀尖刺。近日發表于《ACSOmega》的一項研究，有......
近日，中國科學院青島生物能源與過程研究所單細胞中心與中國科學院天津工業生物技術研究所合作，研究開發了一種集成的、高靈敏度且高通量的錯誤校正平臺eMBS。能夠通過理性設計工程化MutS蛋白并結合磁珠分離......