聚焦LDT丨如何規范化實驗室自建檢測方法

盡管國內法規層面仍無對LDT的準確定義、范圍界定及管理規定，但已小范圍展開了試點。早在 2013 年 9 月，原國家衛生計生委醫政管理局就批準成立“國家衛生計生委個體化醫學檢測試點單位”（也稱為“LDT 試點單位”），首批試點單位包括中國醫科大學第一附屬醫院、中南大學湘雅醫學檢驗所、北京博奧醫學檢驗所3家醫療機構。

◇ 試點單位承擔國家衛生計生委個體化醫學檢測相關管理辦法及技術指南驗證；

◇ 對實驗室開發的個體化醫學檢測項目進行驗證、評價及先期試行；

◇ 在項目、技術或產品的準入、審批、收費、物價審批及推廣應用方面與相關部門溝通，為制訂相關政策提供依據。

除了試點單位開發的檢測項目外，其余醫療機構事實上也在進行LDT的開發。

目前國內進行的LDT主要包括 3 類：

1）實驗室通過購買試劑盒原材料如引物、探針、擴增緩沖液、酶等配制自用試劑；

2）實驗室購買經過批準的商品試劑，但對試劑盒組分或操作過程進行了變更；

3）實驗室購買未經批準的無證商品試劑。幾乎所有的 PCR-Sanger 測序、PCR-限制性長度片段多態性分析、PCR-質譜和 PCR-高通量測序等均應納入LDT范疇進行管理。

所以，有自建檢測方法的實驗室進行有效的自我管理是十分必要的。

那么如何讓實驗室的自建方法更規范一些呢？在討論這個問題之前，筆者需要強調下，文章介紹的內容僅是給大家一個參考和進行學術交流，如有不同建議，歡迎交流！

如何讓LDT更規范？

制定儀器設備的質量保證方案

01

① 檢查儀器設備的擺放及安裝

檢查儀器設備的環境、安裝、防塵、防潮、工作溫度以及噪聲是否符合廠商要求；檢查儀器設備電源、穩壓設施、UPS 和地線是否符合安裝要求，是否遠離高頻電源或高壓線纜，以防電磁干擾對儀器設備的影響；檢查儀器設備是否受陽光直接照射，是否遠離腐蝕性、揮發性物體。

② 建立、完善儀器設備的使用規章制度

建立、完善儀器設備的使用崗位責任制度，將集中管理和分散管理相結合，貴重儀器設備由專人管理，維護責任制度的相關規定；建立、完善儀器設備的操作制度，格遵守操作規程，嚴禁違規操作；建立、完善開機檢查、使用、正常維護、報警排除及故障檢修制度；建立、完善室內外質量控制等級和分析制度，保證儀器設備的運行穩定性。

③ 加強儀器設備操作人員的培訓

加強人員上崗前的培訓，操作人員需充分了解儀器設備的結構、工作原理、維護知識，熟悉調試、校準、儀器設備參數和參數修改的正確方法及儀器設備報警的快速識別和故障排除方法，充分掌握質量管理方法和問題分析；此外，還需學習和掌握儀器設備涉及的物理、化學及電子方面的知識，提高外語閱讀能力。

標準操作規程

02

生物樣品分析實驗室必須具有一套完整的SOP， 對實驗過程中的所有程序進行統一的描述。SOP的描述必須清晰和準確，但不應過于詳細，以免由于過于詳細的細節或步驟使SOP難以被完全遵循從而引起合規性方面的問題。在清晰和簡潔之間一定要尋找一個平衡點。此SOP給予特定人員發布SOP的權利并要求相關人員接受適當的培訓。SOP應該包括目的、范圍、適用人員、程序等內容。一個實驗室或一個機構內的所有SOP應采用相同的格式以保持一致性。

SOP應由在此類工作中已經經過考核的人員來審核批準。還需對SOP進行階段性的審閱， 以保證SOP能反映出實驗室的現行操作，并與法規要求和行業內的普遍做法保持一致。應保存員工的SOP培訓記錄， 并在新SOP發布、老SOP更新和廢止時對上述記錄及時進行更新。

室內質量控制內容

03

① 最低檢測限

參照參照美國國家臨床實驗室標準化委員會（CLSI）頒布的EP17-A2文件要求，采用同一批號試劑，重復測定零濃度校準品 20 次，計算測定結果的均值`x及標準差（s），(`x±2s) 以作為試劑的最低檢測限。

② 精密度

參考美國國家臨床實驗室標準化委員會（CLSI）頒布的CLSI EP5-A2 文件要求，重復性精密度通過測定兩個濃度水平的質控樣本，每個樣本重復測定20次，計算變異系數（CV），以精密度不高于6.0% 作為判斷標準。期間精密度通過測定兩個濃度水平的質控樣本，每個樣本重復測定 3 次（x1、x2、x3），連續測定20天，計算批間變異系數（CV），以精密度不高于8% 作為判斷標準。

③ 正確度驗證

參照CLSI推薦的EP15-A3文件，測定不同批次的標準品和公認的質控物，分別重復測定3次后，計算均值和參考值的相對偏差值，以低于8%作為合格標準。或參考CLSI EP9-A3方案，同時用實驗方法和參考方法檢測40份新鮮樣品，每天做10份樣品，每個樣品只做1次，連續4d。以參考方法結果為橫座標，實驗方法為縱座標，繪制散點圖，計算回歸方程，計算參考區間兩端和醫學決定水平處的相對偏倚。正確度的質量要求偏倚≤5.5%正確度得到確認。5.5%為衛生行業標準規定的質量要求，級別為優等。

④ 線性范圍

參照CLSI推薦的EP6-A文件，接近測量低限樣本和接近測量高限樣本各取1份，將低限樣本和高限樣本按照1:0、3:1、1:1、1:3、0:15個濃度比例配制梯度樣本，每個濃度樣本重復測定3次并計算均值；以理論值為自變量，以測量值為因變量，計算線性回歸方程，求得變異系數；將按比例的稀釋度作為理論值代入該線性回歸方程，求出估算值，進而求出估算值與測量值偏差；最后得出相對偏差與絕對偏差。

室間質量評價內容

04

室間質量評價(external quality assessment schemes，EQAS)是指由外部獨立權威機構統一向多家實驗室發放樣品或樣品盤，并收集，分析和反饋實驗室的檢測結果，以評價實驗室常規工作的質量，觀察檢測結果的準確性，建立起各實驗室分析結果之間的可比性的過程。

◇ 開展EQAS能確定實驗室的檢測以及持續監控的能力；

◇ 能識別實驗室可能存在的問題，觀察糾正措施的實施效果；

◇ 能確定檢測技術的有效性和可比性及方法的不確定度；能識別實驗室間的差異，增強員工信心。

根據功能不同，EQAS也可分為能力驗證(proficiency testing，PT)，傳統型(打分制的)EQAS和教育型EQAS。其中教育型EQAS不打分，不評比，在為參評實驗室提供信息和技術服務的基礎上，更注重實驗室的自我評價和自我提升，以達到持續監控和改進的目的。

國內室間質量評價

05

國內的室間質量評價一般是由國家衛生健康委臨床檢驗中心（NCCL）發布計劃和執行，有參與需求的實驗室可以選擇匹配自建檢測方法的室間質評計劃。

2021年NCCL發布的室間質評目錄如下：

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國際室間質量評價

06

有些實驗室為了進一步驗證其能力，往往會參加一些國際間的質量評價計劃或者能力驗證。比較常見的例如參加美國病理學家學會，簡稱（College of American Pathologists，CAP）。

CAP成立于1947年，由具有專業資質的近18,000位臨床檢驗學家和病理學家組成，是世界公認的醫學檢驗實驗室認證機構之一。CAP涉及檢驗、病理、毒理、遺傳等18種評審檢查點，幾乎涵蓋了所有醫學實驗室診斷領域，在行業內被公認為“金標準”。通過 CAP 認證的臨床實驗室意味著其實驗室檢測水平已達到世界頂尖水準，并獲得國際間各相關機構的認同。

無室間質量評價項目的實驗室間比對

07

無室間質量評價項目的實驗室間比對一般采用實驗室間樣本分割法進行比對，這種情況一般比較少見。遇到這種情況我們可以參考衛生行業標準WS/T 415-2013 無室間質量評價時實驗室檢測評估方法，這里就不在過多介紹。

引用：

[1] 施一然， 梁毅. 我國臨床實驗室自建檢測方法管理優化及對策建議[J]. 中國藥業， 2019， 028(012):92-95.

[2] 吳培東. 醫學檢驗實驗室臨床化學自建檢測方法的質量保證方案[J]. 醫療裝備， 2020， v.33；No.406(09):67-69.

[3] WS/T 403-2012. 臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標.中華人民共和國衛生部[S].2012-12-28.