腦脊液蛋白定性試驗（潘氏法）標準操作規程

1. 實驗原理

腦脊液中球蛋白與苯酚結合，可形成不溶性蛋白鹽而下沉，產生白色渾濁或沉淀。

2. 標本采集：

2.1 標本種類：腦脊液，由臨床醫師進行腰椎穿刺采集，必要時可從小腦延腦池或側腦室穿刺獲得。

2.2 標本要求：將腦脊液分別收集于3個無菌試管中，第一管作細菌培養，第二管作化學分析和免疫學檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查。每管收集1-2毫升。

2.3 遇高蛋白標本時可采用EDTA K2抗凝。

3. 標本儲存：立即送檢。

4.標本運輸：室溫運輸。

5. 標本拒收標準：污染，久置標本。

6 試劑：5%苯酚溶液：取純苯酚25ml,加蒸餾水至500ml，用力振搖，置37℃溫箱內1-2天，待完全溶解后，置棕色瓶內保存。

7. 操作步驟：取潘氏試劑2-3ml于小試管內，用毛細滴管滴入腦脊液1-2滴，襯以黑背景，立即觀察結果。

8. 結果判斷

陰性：清晰透明，不顯霧狀

極弱陽性（±）：微呈白霧狀，在黑色背景下才能看到

弱陽性（+）：灰白色云霧狀

陽性（+）：白色渾濁

強陽性（3+）：白色濃絮狀沉淀

最強陽性（4+）：白色凝塊

9. 質量控制

10. 臨床意義

10.1 腦脊液蛋白質含量增加，提示患者血腦屏障受破壞，常見于腦、脊髓及腦膜的炎癥、腫瘤、出血等以及腦軟化、腦退化性疾病、神經根病變和引起腦脊液循環梗阻的疾病等，當腦脊液中蛋白質在10g/L以上時，流出后呈黃色膠凍狀凝固，而且還有蛋白-細胞分離現象，臨床上稱為Froin綜合征，是蛛網膜下腔梗阻性腦脊液的特征。

10.2 含血的腦脊液可使蛋白質含量增加，為鑒別原來有無蛋白質增加，可用每微升1萬個紅細胞的相當增加蛋白質80mg/L來推算，最后用含血的腦脊液中實測的蛋白質量減去出血時從血中帶入的蛋白質量由含紅細胞數推算成的蛋白質量，即為原來腦脊液的蛋白質含量。

常見中樞神經系統疾病的腦脊液檢查特點

11. 方法學評價：潘氏試驗所需標本量少，靈敏度高，試劑易得，操作簡便，結果易于觀察，其沉淀多少與蛋白質含量成正經比，部分正常腦脊液亦可出現極弱陽性結果。Ross Jine試驗主要沉淀的是球蛋白，但敏感性較弱，NoneApett試驗可分別檢測球蛋白和白蛋白，但操作較繁，極少選用。

12. 變異的潛在來源

12.1 取材不當。

12.2 涂片過厚或過薄，影響形態觀察。

13 操作注意事項：

13.1 取材后，必須立即涂片。

13.2 推好的血膜片應在空氣中搖動，使其盡快干燥，以免細胞變形。天氣寒冷或潮濕時，應于37℃溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小。

13.3 根據血膜厚薄，細胞量多少及室內溫度等把握好染色時間，使染色效果滿意。

13.4 鏡檢時循序檢查，必要時用油鏡確認；并注意整體情況。

14. 參考文獻：中華人民共和國衛生部醫政司編。全國臨床檢驗操作規程（第二版）17-18頁。