診斷以典型臨床表現(發熱、咽痛、肝脾及淺表淋巴結腫大)，外周血異型淋巴細胞>10%和嗜異性凝集試驗陽性為依據，并結合流行病學資料多可作出臨床診斷。對嗜異性凝集試驗陰性者可測定特異性EBV抗體(VCAIgM、EAIgG)以助診斷。
本病應注意與肺炎支原體、巨細胞病毒、腺病毒、甲肝病毒感染、風疹、皰疹性咽炎所致的單核細胞增多相區別。其中巨細胞病毒所致者最常見，有人認為在嗜異性抗體陰性的類傳染性單核細胞增多癥中，幾乎半數與CMV有關。縱隔淋巴結腫大者，應于淋巴瘤等惡性疾病鑒別。
