固定發射波長,用不同波長的激發光激發樣品,記錄下相應的熒光發射強度,即得激發光譜。
熒光的相對強弱,與很多因素有關,可用(1)式表示:式中F表示熒光強度,K是儀器常數,Φ為熒光量子產率,I0是激發光強度;ε是樣品的克分子消光系數;b為樣品池的光徑長度;c為樣品濃度。當濃度很稀時(1)式可近似為(2)式:
從此式可知,在低濃度等件下,樣品濃度和熒光強度呈線性關系。 用τ表示熒光壽命,并以(4)式定義之:(4)
該式表達了熒光物質被一瞬時光脈沖激發產生的熒光隨時間的衰減。熒光壽命τ就是熒光強度下降到最大熒光強度F0的1/e時所需要的時間。
熒光偏振常用偏振度表示,其定義如(5)式:
式中F∥表示激發光起偏器和熒光檢偏器的透射軸方向平行時測得的熒光強度;F⊥是上述兩方向互相垂直時的熒光強度。當 P=0時,說明完全不偏振;P在-1至+1之間即為部分偏振。
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