熒光抗體技術檢測基本原理

熒光抗體技術檢測基本原理 

某些熒光物質在一定條件下．羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒既能與抗原或抗體結合。又不影響抗原與抗體的特異性結合。用熒光抗原或熒光抗體對待檢標本染色后，在熒光顯微鏡下觀察，可看到發出熒光的抗原抗體復合物。作為蛋白質標記用的熒光物質需具備如下條件：①有與蛋白質分子形成穩定共價鍵的化學基團，但不形成有害產物；②熒光效率高，與蛋白質結合的需要量少；③結合物在一般條件下穩定，結合后又不影響免疫活性；④作為組織學標記，結合物的熒光必須與組織的自發熒光有良好的反襯；⑤結合程序簡單，能制成直接應用的商品。滿足這些要求的熒光物質有硫氰酸熒光素(FITC)、四乙基羅丹明(RB20())和四異甲基羅丹明(TMRITC)等，其中應用zui廣的是異硫氰酸熒光素。熒光抗體(抗原)染色法有以下幾類：

1．羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒直接法 直接滴加2～4個單位的標記抗體于標本區，置試盒中．于37℃染色30min，然后置大量pH7．O～7．2的磷酸緩沖液(PBS)中漂洗15min，干燥．封載即可鏡檢。

2．雙層法標本先滴加朱標記的抗血清．置濕盒內。37℃30min。漂洗后，再用標記的抗抗體染色37℃30min．漂洗、干燥、封載。

3．夾層法本法主要用于檢測組織中的Ig。標本先用相應的可溶性抗原處理，漂洗后再用與該檢Ig有共同特異性標記抗體染色。

4．抗補體染色法用熒光標記抗補體抗體，即可用以示蹤能進行補體結合的任何抗原抗體系統。將已滅活的抗血清與1：10稀釋血清混合．滴加于標本上，37℃30～60min，漂洗后．羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒再用抗補體染色37℃30min，漂洗、干燥、封載、鏡檢。