熒光顯微鏡技術的原理

 如圖2所示，在普通的熒光顯微鏡下，我們很難分清紅色、綠色兩種熒光分子標記的不同蛋白（如(a)(c)(e)所示）；那圖中的(b)(d)(f)又是如何實現紅色、綠色兩種蛋白分開呢？該圖為納觀生物有限公司拍攝，我們就以該公司研發的SRiS超高分辨率成像系統為例，給大家介紹下隨機光學重構顯微技術的原理。

       該技術的原理是，通過特殊配置的成像緩沖液（Imaging buffer）以及較高強度的激光，使樣品在每一個瞬間都僅有少量隨機、離散的單個熒光分子處于發光狀態（熒光分子開關， Photo-Switchable fluorophore），其他瞬間處于黑暗狀態（如圖3實時拍攝效果所示），通過擬合，找出每個發光熒光分子中心點的位置。重復拍攝多張圖片之后，就可以把所有熒光分子的中心點位置疊加起來形成整幅圖像，從而得到樣品更多的細節，超分辨顯微重構的結果不僅可以看到粗的纖維，還可以顯示普通熒光顯微鏡下觀察不到的極細纖維的精細結構（如圖3重構結果所示）。