熒光顯微鏡濾色片的選用

熒光顯微鏡濾色片的選用

濾色片是熒光顯微鏡的關鍵部件, 在熒光顯微鏡中按其功能可分為激發濾色片和截止濾色片兩類。激發濾色片的功能是從光源中分析出所需的特定光譜, 以激發標本產生熒光。截止濾色片的功能是僅把標本上發出的熒光透過成像, 而將其它光阻擋不參與成像, 一般激發濾色片安置在緊靠光源, 而截止濾色片在物鏡與目鏡之間。

按其透過光譜特性曲線可分為“短波通過”、“長波通過”和“波段通過”濾色片。波段通過濾色片按波帶寬度又可分為“寬波帶”和“窄波帶”濾色片, 如果半寬帶（即HW = 50% 的透射峰的主透射帶的寬度之半）大于50nm , 視為“寬波帶型”; 若小于20nm , 則可視為“窄波帶型”。

    濾色片初期用貯放玻璃盒中的有色液體, 后改用帶色膠質片, 由于易變色和使用不方便已被淘汰。現在經常使用的為色玻璃和干涉濾色片, 色玻璃大都屬寬波帶濾色片, 透過波段寬, 透過率隨厚度而降低, 價格相對低廉。由于色玻璃與空氣的界面上, 約有4% 光線被反射掉, 玻片愈多, 光能損失愈大, 限制了它的使用性能。干涉濾色片的出現, 可按需要制成能透過或截止一定波段的濾色片, 從而促使熒光顯微術的進展, 現代技術上已能對某波段的透射率或反射率進行控制。

由此可見, 多數熒光色素和熒光發色團分子具有相當寬的吸收光波帶和熒光波帶, 峰值間隔又較大, 所以在需要得到強熒光時, 很少使用窄波帶濾色片, 因為它致使相當大的光源能量損失了（沒有利用） ,僅在光源的強發射譜線和激發時的吸收峰相重合時才使用。當使用寬波帶濾色片時, 往往組織成分和光路中的自發熒光會被這類濾色片中的短波光激發出來, 加到熒光圖象中而混擾。多數應用中, 激發濾色片的半寬約20nm 就能給出滿意的結果。