蛋白芯片檢測Hp

大淵幽門螺旋桿菌（HP）IgG抗體蛋白芯片檢測系統（PBT-HP-01-A型芯片）是一種定性的蛋白芯片，共放有細胞毒素相關蛋白（CagA），尿素酶C（ureC）二個指標，采用間接法原理，特異性強，靈敏度高。標記方法為免疫金標記。
　　大淵幽門螺旋桿菌（HP）現癥蛋白芯片鑒定檢測系統（PBT-HP-02-A型芯片）是一種定性的蛋白芯片，共放有細胞毒素相關蛋白（CagA），尿素酶C（ureC）和熱休克蛋白60（HSP60）三個指標，采用間接法，特異性強，靈敏度高。標記方法為免疫金標記。
　　幽門螺旋桿菌（HP）是1982年Marshall和Warren從慢性活動性胃炎患者的胃粘膜中分離出的定植于胃粘膜的革蘭氏陰性菌，感染呈全球性分布，多數地區感染達50%。HP是慢性胃炎、消化性潰瘍的主要病因，與胃癌發生密切相關。世界衛生組織（WHO）已將HP列為第Ⅰ類致癌因子。
　　HP顯示高度基因多態性，不同HP菌株存在基因型和表型差異，使得不同HP菌株致病力強弱不同。根據HP菌株有無細胞毒素相關蛋白A(Cytotoxin associated gene A, CagA)蛋白表達將其分為兩型：Ⅰ型是高毒力株，含CagA基因，表達細胞CagA蛋白；這類菌株能造成胃上皮細胞空泡、損傷、壞死及潰瘍，因此與胃、十二指腸潰瘍及誘發癌變密切相關。Ⅱ型是低毒力株，不具有編碼CagA的基因，不表達CagA蛋白。這類菌的感染不能侵入胃上皮細胞，一般可長期無臨床癥狀。大約60%～80%的菌株產生CagA，幾乎所有的野生型HP都產生尿素酶(Urease, Ure)。它們是HP最主要的抗原成份，在HP致病過程中起著重要作用。CagA及UreC能夠刺激機體產生強烈的免疫反應, 在HP感染患者的血清中可檢測到相應的抗體。CagA和UreC在 HP的致病過程中起重要作用，胃病患者中HP檢出率遠高于人群中總的檢出率。HP的感染率與年齡、社會經濟狀況、受教育程度、衛生條件、居住環境等密切相關。人類一旦感染HP后，若不治療，可終身處于持續感染中。因此檢測相應的抗體有助于胃炎、消化性潰瘍和胃癌的防治。我國人群HP的感染率高達50～80%防治任務十分艱巨。
　　CagA蛋白具有高度的免疫原性，在粘膜表面，所有消化性潰瘍的病人和60%功能性消化不良患者具有CagA抗體，血清中檢測到CagA是HP感染的一個高度特異性的標志。CagA與毒力增強有關，如從90%的十二指腸潰瘍患者分離的菌株為CagA陽性，而僅50%～60%的淺表性胃炎患者分離到的菌株為CagA陽性。CagA還與誘導胃上皮細胞產生IL-8有關。Weel等對155個HP感染病人進行研究的結果表明：⑴7%病人有CagA陽性和CagA陰性菌株的混合感染，因此有些CagA抗體陽性的病人分離出CagA陰性的菌株；⑵具有CagA抗體的病人98.3%感染CagA陽性菌株；⑶CagA陽性菌株在消化性潰瘍患者中的出現率為93.4%，高于功能性消化不良者，后者出現率為64.4%；⑷Ⅰ型菌株在消化性潰瘍患者和功能性消化不良患者中的出現率分別是51.6%和31.6%；⑸僅僅4%VacA陽性菌株是CagA陰性；⑹37%消化性潰瘍患者感染CagA陽性、VacA陰性菌株。統計學表明，消化性潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌三組CagA基因的陽性率顯著高于淺表性胃炎組(ｘ2=9.77～24.30,ｐ<0.01), 胃癌組也明顯高于消化性潰瘍、萎縮性胃炎組(ｐ<0.05) 發現消化性潰瘍患者血清抗CagA抗體的陽性率幾乎100%, 顯著高于非潰瘍患者。Kuipers等采用前瞻性方法進行長達10～13年的追蹤觀察, 發現CagA抗體陽性組發生萎縮性胃炎62%, 而陰性組僅為32%。血清CagA HP 抗體陽性者粘膜炎癥重度占90.9%, 陰性者炎癥重度者占55.6%，血清CagA HP抗體陽性者胃粘膜重度炎癥比例明顯較高。
　　所有HP都產生尿素酶，HP具有很強的尿素酶活性，尿素酶占HP總蛋白量的6%。尿素酶使胃液中的尿素分解為NH3和CO2，使細菌周圍局部PH增高，有利于HP在低PH環境中生存，同時產生的NH3造成胃粘膜損傷。目前發現尿素酶基因大小約為7.5kb，共有9個閱讀框，分別為UreC、UreD、UreA、UreB、UreI、UreE、UreF、UreG和UreH。UreA、UreB為尿素酶的兩個結構亞單位，它們具有高度保守性，天然蛋白分子量為550kD，由六個UreA和六個UreB組成，每個UreB的活性位點均結合有兩個鎳離子。UreC、UreD為調節部分，是表達尿素酶活性所必需的。后五個閱讀框為尿素酶附加基因，其中UreI和UreH為HP所特有。 序列分析表明不同來源的HP菌株尿素酶基因存在差異，對其進行PCR-RFLP分析，可以區別不同來源的HP。新近TanahashiI等體外研究發現，純化的HP尿素酶可誘導胃上皮細胞及中性粒細胞表達分泌促炎細胞因子白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-a（TNF-a）等，但對IL-8的分泌無誘導作用。HP的尿素酶主要是胞漿酶，其作用為保護HP抵御胃的酸性環境及酸性環境下刺激細胞蛋白質的合成。但HP的尿素酶也呈現于細胞表面，目前認為細菌表面的尿素酶主要是其它細菌裂解選擇性釋放后在細菌表面吸附的結果 。尿素酶是HP主要抗原之一, 所有的野生型HP都產生尿素酶，它可以引起HP感染患者的血清中抗HP IgG和IgA的滴度顯著升高，因此可用以確定是否存在HP的感染，并可判定感染嚴重程度和抗HP療效。通過志愿者血清學檢測研究顯示在感染后22ｄ～33ｄ出現, 抗體的滴度同炎癥程度相關。