二、透析和超濾
1.透析（Dialysis）：
就是利用蛋白質分子不能通過半透膜（Semipermeable membrane）而小分子可以自由透過的性質，使蛋白質與小分子物質分開。
作用：脫鹽、無機離子和小分子物質等。
透析膜：動物膜、羊皮紙、火棉膠、賽璐玢或其他材料等。
2.超濾（ultrafiltration）：
是利用壓力和離心力，借助于超濾膜將不同分子量的物質分離的技術。
Ultrafiltration的功能：純化和濃縮（同PEG，聚乙二醇）。
Ultrafiltration膜：丙烯晴、醋酸纖維素、硝酸纖維素和尼龍等。
第三節 蛋白質的電泳技術（electrophoresis）
一、基本原理
1. 分子的運動速度與遷移率
（1）蛋白質分子在電場中的泳動速度（v）
F電場力 = (E/d) q；F阻力 = 6πrηv；
當F電場力 = F阻力時， (E/d)q = 6πrηv，
v = Eq/(6πrηd)。r：分子（半球）半徑，
η：溶液 的粘度。
（2）遷移率（M）
M = v / (E/d) = (L/t) / (E/d) = dL / Et
2.影響遷移率的因素
樣品：纖維狀蛋白質和球狀蛋白質具有不同的摩擦力→不同的遷移率。
緩沖液
①離子強度：0.05~0.1摩爾濃度（最適宜的離子強度）。
②pH：決定蛋白質帶凈電荷的多少。
支持介質 一般用比較惰性材料
①吸附作用 對樣品有滯留作用，形成拖尾→帶不清晰，分辨力降低。例如：紙的吸附作用強，醋酸纖維素可以消除這種現象。
②電滲作用 電泳緩沖液相對于固體支持介質的相對移動。
+++o++o++++ +++o++o++++
→
------------------- --------------------------
電滲的結果（造成的影響）：加速陽離子的前進，阻滯了陰離子的移動，但在一般實驗中可以忽略不計。如需矯正，用中性分子（葡聚糖）的遷移程度來確定電滲的大小。
③分子篩作用 如凝膠電泳作用：有助于分子大小有所不同的生物大分子的分離。凝膠中交聯度↑→孔徑減小→大分子移動的阻力↑（與Sephadex凝膠過濾正好相反）。
二、電泳的類型
（一）按有無支持物分
1.不用支持物的電泳（自由界面電泳）：Tiselleas式微量電泳、顯微電泳、等電聚焦（密度梯度）技術、等速電泳技術等。
2. 用支持物的電泳：紙上電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、薄層電泳、非凝膠支持物區帶電泳（支持介質有：淀粉、纖維素粉、合成樹脂粉末等）、凝膠支持物區帶電泳（支持介質有：淀粉膠、聚丙烯酰氨凝膠、瓊脂糖凝膠等）
（二）從使用型式上分
水平式、垂直式、板形、柱形、雙向電泳、連續電泳、電泳—層析相結合的電泳技術等。
三、醋酸纖維素薄膜電泳（cellulose acetate membrane electrophoresis）
1.醋酸薄膜的結構
纖維素的羥基乙酰化→形成纖維素醋酸酯→溶于有機溶劑（如丙酮、氯仿等）涂抹成均勻的微孔薄膜（均一的泡沫結構，滲透性強）。
2.Cellulose acetate membrane electrophoresis優點：
電滲小、分離速度快、樣品用樣量少、分離清晰、無拖尾和吸附現象，染色的本底較淺可透明，便于保存和定量分析。
3.應用：
血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、同工酶、胎兒甲種球蛋白以及核酸等方面的檢測，適合于醫學和臨床檢驗。
四、瓊脂和瓊脂糖凝膠電泳
1.結構及其特征
瓊脂（agar）：紅色海藻中提取出來的多聚糖復合物，具有相同的多糖骨架和不同的取代基（硫酸酯基、甲氧基、羧基等）。
瓊脂糖（agarose）：取代基最少的一種多糖，其電滲作用遠小于agar。
agar和agarose特征：容易制成各種形狀的凝膠，容易掌握和保存，凝膠的均一性好、牢固、富有彈性、容易固定和干燥，干膜可長期保存。
2.agar or agarose gel electrophosesis優點
網孔大、液體多而近似于自由電泳；電泳速度快、區帶整齊、分辯率高、重復性好；無紫外吸收，電泳過程和結果可直接用紫外線檢測及定量分析。
3.應用
（1）分離血清蛋白、脂蛋白、同工酶等。
（2）與免疫化學結合，發展成免疫電泳技術。
（3）分離和鑒定核酸。
五、聚丙烯酰氨凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）
1.定義：是以人工合成的聚丙烯酰氨凝膠作為支持介質的一種電泳技術。
2. 聚丙烯酰氨凝膠的生成
3. 凝膠網孔的大小和適宜的凝膠濃度（%）
4.PAGE的分類及其功能特點
按形狀：圓盤狀和垂直板電泳
按凝膠是否一致分：連續電泳和不連續電泳，其中不連續電泳有較高的分辨力（具有電荷效應、濃縮效應和分子篩效應）。
5. PAGE的作用機制
樣品膠（常省略）
濃縮膠（大孔膠）：蛋白質介于Cl－和Gly之間。Cl－和Gly之間形成低電導區→高電壓梯度→加快蛋白質移動，且膠的孔徑大，對蛋白質移動沒有阻礙→蛋白質在快離子和慢離子之間被濃縮成薄薄的一層。
分離膠（小孔膠）：Gly在pH8.9下解離度聚增→泳動速度超過蛋白質→高電壓梯度消失→蛋白質在均一的電壓梯度和pH條件下分離；同時由于膠孔徑小，具有分子篩效應→使具有相同電荷，只要分子量大小和形狀不同的蛋白質得以分離。
6. PAGE優點及應用
優點：樣品用量少，分辯率高
應用：科研、農、醫及臨床診斷。如蛋白質、酶、核酸的分離及病毒、細菌提取液的分析等。