蛋白質含量的測定實驗

FOLIN 酚法所用的試劑有兩部分組成。試劑甲可與蛋白質中的肽鍵起顯色反應, 試劑乙在堿性條件下極不穩定, 易被酚類化合物還原成藍色(蛋白質中的酚基將磷鉬酸-磷鎢酸還原成藍色復合物)。在一定條件下, 藍色強度與蛋白質的量成正比, 范圍約在25～250 μg/ ml 蛋白質濃度。

蛋白質

碳酸鈉 氫氧化鈉 硫酸銅 酒石酸鈉 鎢酸鈉 鉬酸鈉 蒸餾水 磷酸 濃鹽酸 硫酸鋰 液體溴 酚酞

722S 型分光光度計 電子天平 離心機 容量瓶 試管 吸管

1.  樣品的制備
用臺秤稱取小白菜或其他植物10 g , 用剪刀剪碎后, 用碾缽碾成勻漿, 加水30 ml , 繼續碾10 min , 倒入離心管中, 另加5 ml水將剩余物洗進離心管, 平衡后于1000 r/ min 離心15 min , 取上清10 ml 定容到100 ml , 待測。

2.  標準曲線的制作與樣品測定

按下表操作，A . FOLIN 酚法    B . 考馬斯亮藍法

(標: 標準蛋白質溶液, F : FOLIN 試劑: K: 考馬斯亮藍 G250 試劑。自己制備的蛋白質溶液測定含量時注意稀釋度)

1.  蛋白質樣品和呈色劑都不應有沉淀, 有沉淀應過濾除去。

2.  染料與蛋白質結合后, 形成的藍色復合物易輕度沾附試管壁或比色皿, 每次使用不能用有著色的比色皿。使用完后應立即清洗干靜。