方案1 用 FLAG抗原表位標記蛋白質進行蛋白質免疫共沉淀
方案2 細胞裂解液中相互作用蛋白的親和純化
方案3 多蛋白質復合體的非變性瓊脂糖凝膠電泳實驗
方案4 BN-PAGE 蛋白質分析法
方案5 采用交聯法和質譜法對蛋白質復合體進行拓撲學分析實驗
方案6 亞秒級光交聯：用水溶性金屬復合體監控蛋白質-蛋白質相互作用實驗
方案7 位點特異性蛋白質-DNA 光交聯法實驗
方案8 用 FRET 法分析體內蛋白質的相互作用實驗
方案9 用 GFP 嵌合體監控蛋白質-蛋白質相互作用實驗
方案10 蛋白質陣列：顯微鏡玻片的制備
方案11 蛋白質陣列：標記蛋白并通過陣列檢測來探究蛋白質-蛋白質相互作用
方案12 蛋白質陣列：標記復合體并通過陣列檢測來研究蛋白質-小分子相互作用
方案13 蛋白質陣列：陣列的探針標記方法及激酶-底物相互作用的放射性印跡檢測
方案14 蛋白質陣列：用“三明治法”研究復合體溶液
| 實驗材料 | 抗 FLAGM2 單克隆抗體 293 T 細胞 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | 抗 FLAGM2 瓊脂糖親和凝膠 甘氨酸 辣根過氧化物酶 IEF緩沖液 裂解緩沖液 NaCl 磷酸鹽緩沖液 聚乙烯亞胺 RF10培養基 RPMI 1640 培養基 4 X SDS-PAGE 加樣緩沖液 疊氮化鈉 胰島素 |
| 儀器、耗材 | 大型離心機 配有檢測 GFP 濾片的熒光顯微鏡 培養箱 微型離心機 微量離心管 針頭 多預裝層析柱 搖床 SDS-PAGE 和 2D-IPG SDS-PAGE 儀器 超濾柱 |
| 實驗步驟 |
一、用于小范圍分析的代謝標記
二、細胞裂解
三、用于小范圍分析的免疫共沉淀
四、用抗體層析柱大規模富集 FLAG 標記的蛋白質以及與它相互作用的蛋白質
五、用于純化的蛋白質濃縮
六、純化和鑒定相互作用蛋白
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