當蛋白質的最適穩定量及標記的最佳pH值被確定以后,便可進行標記。具體步驟如下。
(1)根據標記所用膠體金的總量計算出所需要待標記蛋白質的總量。
(2)邊攪拌邊將蛋白質溶液加入膠體金溶液中,逐漸加入,lmg的蛋白質量大約需5min,或在攪拌下將膠體金逐漸加入到蛋白質溶液中,大約需5~10min。
(3)繼續攪拌10min,然后加入5%BSA使其終濃度為1%,或加入3%聚乙二醇(PEG,Mr:20000)使其終濃度為0.05%,其效果BSA要優于PEG。
(4)將標記好的膠體金裝入透析袋中,兩頭扎緊,放人蔗糖或硅膠中濃縮,濃縮到原體積的1/10量,濃縮完畢后純化。如用離心純化方法時,不需要濃縮。
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