蛋白質N端測序樣品要求

檢測儀器:島津 PPSQ-31A 蛋白多肽自動測序儀

一、 蛋白質N端測序的主要應用:

1. 樣品：蛋白質，多肽樣品的氨基酸序列測定

2.優勢：能連續測定 60 個以上的氨基酸序列

3.來源:天然提取（動物/植物/微生物）；合成多肽；重組蛋白等

二、 樣品要求:

1. 純度:>95（基于摩爾數）

2.含量:50-100pmol(液體體積控制在 20ul)

3.修飾封閉:N 端未被封閉

4.樣品形式:液體；干粉；PVDF 膜

5.無干擾物:蛋白酶；氨基酸；胺；鹽分；乙醛；去污劑等

三、 客戶提供信息:

1. 純度：純度檢測結果及圖譜信息

2.修飾：樣品可能修飾情況

3.制備方法：如 SDS,HPLC 及其它方式

4.驗證目的：提供理論序列

5.表觀分子量

其它注意事項：

1. 郵寄要求：使用干冰冷凍保

2.液體樣品：

可用溶劑：蒸餾水、TFA 水溶液、醋酸水溶液、乙氰水溶液以及三甲基胺水溶液。

不可用的溶劑：氨鹽、Tris 等，含有 1 級、2 級胺的鹽溶液，含有 SDS 的溶液

3.固體樣品：

干燥處理的樣品，請先確認干燥處理前的溶劑中不含有上述不兼容的溶劑。如果含有不兼容的溶劑時，請告知我方檢測人員。

4.PVDF 膜：注意以下方面

1)樣品量：5-8 條泳道，每條泳道的樣品盡量用最高濃度樣品，上最大體積（盡量使條帶長胖為正常的 2-3 倍寬度）

2)硝酸纖維素膜：具有耐藥性，不能使用。

3)在電轉印中使用的緩沖液盡可能不含甘氨酸。在使用了含甘氨酸的緩沖液時，請告知我方檢測人員。

4)染色劑推薦使用考馬斯亮藍（CBB-R250）。

5)推薦使用下列的 PVDF 膜：