蛋白Marker使用常見問題分析

做蛋白表達實驗時，通常用SDS-PAGE電泳檢測目的蛋白的表達情況，MARK是其中非常重要的參照物，使用Mark會遇到以下幾種情況：

條帶模糊：

電壓過高或電泳時間過長，產熱過多導致電泳緩沖液溫度升高。建議參照Trans產品使用說明書。

電泳緩沖液陳舊，建議使用新鮮的電泳緩沖液，為了獲得理想的結果建議在使用前將緩沖液預冷。

分離膠的濃度偏低，建議使用合適的膠濃度。

SDS-PAGE凝膠放置時間過長，建議使用新配制的凝膠電泳。

帶型不整齊：

建議點樣時將蛋白marker 放在泳道中間。如在凝膠兩側泳道，由于邊緣效應，離子強度不勻等，均會導致帶型變寬或彎曲。

凝膠配制不勻，凝膠內存有氣泡，或點樣孔中有細碎的殘膠。

樣品滯留點樣孔：

濃縮膠配制有問題或膠孔堵塞。

Marker蛋白表達檢測

免疫熒光技術(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。

技術原理

免疫熒光技術是根據抗原-抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在抗體的性質和定位。