1 mg ml 融合蛋白
50 mg ml CNBr70%(V V)甲酸1 × SDS 樣品緩沖液
1. 進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份各 50 μl 的融合蛋白溶液,將其中一份重懸于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中,另一份重懸于 50 μl 不含 CNBr 的 70% 甲酸中,室溫下反應。
2. 在 0、8、24 及 48 h 的時刻,各取 5 μl 并凍干。
3. 往所有凍干樣本加 20 μl 1 × SDS 樣品緩沖液,煮沸 10 min,加樣于 SDS-聚丙烯酰胺凝膠。
4. 分析凝膠電泳結果以確定完全裂解蛋白質所需的最短溫育反應時間。
1. CNBr 有劇毒,須在通風櫥中操作,使用及棄置均應小心謹慎。
2. 當蛋白質對 CNBr 的裂解有抗性時或當待裂解的為不溶性融合蛋白時,可在反應中加入鹽酸胍至終濃度為 6 mol/L。