融合蛋白化學降解實驗——用溴化氰
實驗材料1 mg ml 融合蛋白試劑、試劑盒50 mg ml CNBr70%（V V）甲酸1 × SDS 樣品緩沖液實驗步驟1. 進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份各 50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中，另一份重懸于 50 μl 不含 CNBr 的 70% 甲酸中，室溫下反應。2. 在 0、8、24 及 48 h 的時刻，各取 5 μl 并凍干。3. 往所有凍干樣本加 20 μl 1 × SDS 樣品緩沖液，煮沸 10 min，加樣于 SDS-聚丙烯酰胺凝膠。4. 分析凝膠電泳結果以確定完全裂解蛋白質所需的最短溫育反應時間。展開 注意事項1. CNBr 有劇毒，須在通風櫥中操作，使用及棄置均應小心謹慎。2. 當蛋白質對 CNBr 的裂解有抗性時或當待裂解的為不溶性融合蛋白時，可在反應中加入鹽酸胍至終濃度為 6 mol/L。......閱讀全文
融合蛋白化學降解實驗——－用溴化氰
實驗材料1 mg ml 融合蛋白試劑、試劑盒50 mg ml CNBr70%（V V）甲酸1 × SDS 樣品緩沖液實驗步驟1. 進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份各 50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中，另一份重懸于 5
融合蛋白化學降解實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 CNBr甲酸SDS儀器、耗材 離心機分光光度計水浴鍋實驗步驟 1. ?進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重懸于50 μl 含CNBr 的70%甲酸中，室溫下
融合蛋白化學降解實驗
基本方案 用溴化氰 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 1 mg ml 融合蛋白
融合蛋白化學降解實驗
基本方案 備選方案1 備選方案2 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白
融合蛋白化學降解實驗1
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒CNBr甲酸SDS儀器、耗材離心機分光光度計水浴鍋實驗步驟1. ?進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重懸于50 μl 含CNBr 的70%甲酸中，室溫下反應。2
融合蛋白化學降解實驗2
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒Tris·ClNaCl鹽酸胍羥胺裂解緩沖液SDS儀器、耗材離心機水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?進行預試驗以確定最短保溫反應時間。將50 μl 1 mg/ml? 融合蛋白與50 μl 2×羥胺裂解緩沖液混合在1.5 ml 微量離心管中，45℃溫育反應。?2. ?在0、2、4、
融合蛋白化學降解實驗3
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒天冬氨酸脯氨酸甲酸乙酸鹽酸胍儀器、耗材電泳儀離心機水浴鍋實驗步驟1. ?進行預實驗確定最佳的水解條件。準備四個反應混合物：（1）反應1：20 μg 溶解在70%甲酸中的融合蛋白。（2）反應2：20 μg 溶解在70%甲酸/6 mol/l 鹽酸胍中的融合蛋白。（3）反應3：
鈣調蛋白的溴化氰裂解實驗
試劑、試劑盒 甲酸純的鈣調蛋白 溴化氰乙腈實驗步驟 材料甲酸（市售最髙級（如AldrichChemicalCo.，Inc.)純的鈣調蛋白（干粉；無鹽（0.1~1 mg)溴化氰（CNBr)(晶體）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Bak
鈣調蛋白的溴化氰裂解實驗
鈣調蛋白的溴化氰裂解實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甲酸 純的鈣調蛋白 溴化氰
鈣調蛋白的溴化氰裂解實驗
試劑、試劑盒甲酸純的鈣調蛋白溴化氰乙腈實驗步驟材料甲酸（市售最髙級（如AldrichChemicalCo.，Inc.)純的鈣調蛋白（干粉；無鹽（0.1~1 mg)溴化氰（CNBr)(晶體）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Baker)
蛋白共沉淀檢測實驗_備擇－用GST融合蛋白
實驗材料全細胞抽提物試劑、試劑盒谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿抗體免疫共沉淀緩沖液氯化鈉蛋白 A G-瓊脂糖漿2 × 樣品緩沖液（用于 SDS-PAGE 膠）儀器、耗材20 ml 注射器和 18-G 針頭漢密爾頓注射器實驗步驟1. 按照蛋白 A/G-瓊脂糖漿所述的方式準備兩份樣本（見「用蛋白
方案6－用溴化氰切割－MetX－鍵實驗
實驗材料凍干的蛋白質試劑、試劑盒溴化氫甲酸β-巰基乙醇NH4HCO3次氯酸鈉溶液儀器、耗材通風廚濃縮器小離心管氮氣實驗步驟一、還原1.將蛋白質溶解在 0.2mol/L 碳酸氫銨中，終濃度為 10~20mg/mL。2.加人β-巰基乙醇，其濃度在 1%~5% 之間（體積分數）。3.在溶液上方吹掃氮氣以置
融合蛋白酶解實驗_－用－Xa－因子
使用基因融合表達系統在大腸桿菌中表達外源基因已越來越受歡迎。其原因在很大程度上歸因于融合系統能夠產生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽轉移酶以及硫氧還蛋白均被證實能非常成功地生產正確折疊、有生物活性的蛋白質。其中每一種都備有方便的純化方法，可將融合蛋白與細胞污染物分開。所產生的蛋白質適用于進行其生物學
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相互作用緩沖液PK 緩沖液還原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗滌緩沖液 1 洗滌緩沖液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP儀器、耗材 與待篩選蛋白結合的膜或濾膜Sephadex G-50 轉柱實驗步驟 材
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
GST 融合蛋白作為在細菌中表達的重組蛋白，從它們被介紹以來，已用于成千上萬個研究項目中（Smith and johnson 1988)。它們常常被用于制備抗體，這些抗體可用于研究蛋白質-蛋白質相互作用以及分析生化反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相
GST－融合蛋白沉降實驗
實驗材料 細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒 裂解緩沖液SDS 聚丙烯酰胺凝膠探針GST 蛋白儀器、耗材 沸水浴翻轉祥品旋轉儀谷胱甘肽瓊脂糖球珠實驗步驟 材料緩沖液和溶液將緩沖液稀釋到適當濃度。裂解緩沖液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GST－融合蛋白沉降實驗
GST 沉降實驗與 far western(方案 2) 相比有—個優點：探針蛋白是在更自然的環境下與可能的搭檔蛋白孵育，因而增強了相互作用的有效性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒裂解
GST－融合蛋白沉降實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞裂解液 其中蛋白質 35S 用標記 試劑、試劑盒 裂解緩沖液 SDS 聚丙烯酰胺凝膠
蛋白質與溴化氰活化的瓊脂糖結合實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 蛋白質
蛋白質與溴化氰活化的瓊脂糖結合實驗
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒瓊脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸鈉-乙酸磷酸二氫鉀儀器、耗材天平燒瓶螺旋攪拌器布氏漏斗實驗步驟實驗所需「試劑」具體見「其他」1. 制備 CNBr-活化的瓊脂糖 4B以下步驟必須在通風櫥中小心進行。用 3 mol/L NaOH 將瓊脂糖 4B 懸液調整為 p
蛋白質與溴化氰活化的瓊脂糖結合實驗
實驗方法原理 實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 瓊脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸鈉-乙酸磷酸二氫鉀儀器、耗材 天平燒瓶螺旋攪拌器布氏漏斗實驗步驟 實驗所需「試劑」具體見「其他」1. 制備 CNBr-活化的瓊脂糖 4B以下步驟必須在通風櫥中小心進行。用 3 mol/L NaOH 將瓊
基因置換實驗——構建融合蛋白
實驗材料菌株BY4741質粒PDB118試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液儀器、耗材YPD 平板YPD 液體培養基血球計數板SC-his平板實驗步驟YPD 平板 第 1 天將菌株 7-3 在 YPD 平板上劃單克隆，30°C 下培養兩天。第 3 天挑取單克隆，在 5 mlYPD 液體培養基中培養，30°C 過
融合蛋白的酶解實驗
基本方案 輔助方案 備選方案1 輔助方案 備選方案2 備選方案3 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白
融合蛋白的酶解實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 SDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機實驗步驟 1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間：?（1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應（2）反應2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
融合蛋白的酶解實驗2
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDS鹽酸胍CaCl2儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?將融合蛋白在≥10倍體積的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 鹽酸胍中透析4 h，或將鹽酸胍加入融合蛋白中至終濃度為6 mol/l。2. ?將樣品在100倍體積的20 mmol
融合蛋白的酶解實驗3
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDS鈉鹽凝血酶裂解液凝血酶儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?準備兩個小量預試驗以確定最佳裂解反應條件：?（1）反應1：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（在合適的緩沖液中）及0.2 μg 凝血酶。（2）反應2：5 μl 1 mg/ml?融合蛋白溶液（模擬
融合蛋白的酶解實驗6
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDSCaCl2重組牛腸激酶儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?做預試驗監測腸激酶與融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率，準備5個反應體系：?（1）反應1至4：20 μl 融合蛋白；0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK，加50 mmol/l Tris·Cl
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少，尤其是當
融合蛋白的免疫篩選實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 LB頂層瓊脂糖疊氮鈉第一抗體儀器、耗材 硝酸纖維素濾膜實驗步驟 1. ?在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文庫的滴度，宿主菌為大腸桿菌LE392菌株，每個平板使用7 ml 1%LB頂層瓊脂。2. ?選擇適當的滴度鋪平板，于37℃溫育8 h。?3. ?